BUD14'ün SPOC mekanizmasını kontrol eden görevinin karakterizasyonu

Ekmek mayası olarak da adlandırılan Saccharomyces cerevisiae, mitotik iğ ipliği oryantasyonun ve de bu oryantasyonun asimetrik hücre döngüsü üzerindeki etkilerini araştırmak için oldukça ideal bir organizmadır. Anne ve yavru hücrenin her birine eşit birer DNA kopyasının aktarılması için, ekmek mayasının mitotik iğ iplikleri polarite ekseninde hizalanmak zorundadır. İğ ipliği yönü kontrol noktası (SPOC) hücre dögüsünün ilerleyişini iğ ipliklerinin yanlış yönde hizalanmasına bağlı olarak durdurur. Bu mekanizmadaki sorunların hücrenin genomik kararlılığının bozulmasına ve de sonuç olarak poliploidi ve anöploidinin oluşmasına neden olduğu bilinmektedir. Buna bağlı olarak, bu kontrol noktası ploidinin doğru aktarımı için gereklidir. Ancak bu mekanizmanın tam anlamıyla nasıl çalıştığı bu zamana kadar aydınlatılamamıştır. Bu çalışmada, Bud14 proteininin bu mekanizmada görev alan bir protein olduğunu keşfettik. BUD14'ün yokluğunun mitozdan çıkış mekanizması bozulmuş hücrelerde büyümeyi teşvik etmesi bu proteinin mitozdan çıkışı engelleyen bir protein olduğunu göstermektedir. Ayrıca, BUD14'ü eksik olan hücrelerde SPOC mekanizmasının çalışmadığını ve buna bağlı olarak mitotik iğ ipliklerinin yanlış hizalanması durumunda bu kültürlerin çoklu çekirdekli fenotipte hücrelere sahip olduğunu gösterdik. Bulgularımız, Bud14'ün bu görevinin formine bağlı aktin polimerizasyonu görevine bağlı olmadığını kanıtlamaktadır. Bud14'ün mitotik hücre döngüsünü engelleyici görevini yapması için Glc7 ile etkileşmesi gerektiğini gösterdik çünkü Glc7'nin bu etkileşime sahip olmayan versiyonunun (glc7-12) da SPOC mekanizmasının bozulmasına neden olduğunu gözlemledik. Deneysel bulgularımız ışığında, Bud14-Glc7 kompleksinin Bfa1-Bub2 kompleksinin metafaz ve anafazda Mil Pole Gövde (SPB)'ye olan lokalizasyonunu sınırladığını gösterdik. Ayrıca, Bud14'ün iğ ipliklerinin yanlış hizalanması sonucunda yavru hücre korteksinden düştüğünü ve hücre boyunca yayıldığını gözlemledik. Bud14-Glc7 kompleksinin SPOC kinaz olan Kin4 üzerinde bir etkisinin olmadığını, aksine bu iki yolağın iğ ipliği yönüne bağlı olarak hücre döngüsünü engellemek için birbirlerine paralel olarak çalıştığını modelledik.