Cloning, expression and biochemical characterization of full size and truncated novel CCDC-124 protein in e. coli

Proteinlerde yapısal bir mofif olan sarmal-bobin domeyini içeren-124 (CCDC-124: Coiled-coil domain containing 124) motifi, düşük organizasyonlulardan yüksek organizasyonlulara kadar uzanan geniş bir spektrumdaki ökaryotlarda korunmuş bir proteindir. CCDC-124 sitokinetik rolü ile uyumlu olarak sentrozom ve orta cisimcikte lokalize olmasına rağmen, nüklear ve sitoplazmik kompleksler arasında bir mekik gibi görünmektedir. CCDC-124 en az bir olası RNA-bağlama bölgesi içermektedir. Daha önceki kütle spektrometrisine dayanan proteomik çalışmalarımıza göre CCDC-124'ün nüklear ve sitoplazmik faz ayırımı kompleksleri ile ilişkili olduğu görülmektedir. Bugüne kadar proteinin işlevini ve özelliklerini tanımlamak için birçok çalışma yapılmıştır. Bu çalışmada ise CCDC-124 proteininin çeşitli parçalarının proteinin biyokimyasal ve biyofiziksel özellikleri üzerindeki işlevsel rolünün araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla CCDC-124 proteininin güdükleştirilmiş (kesilmiş) dört mutantı hazırlanmıştır: 32 kDa izoformu için C-ucu olmayan bir mutant ve N-ucu olmayan ikinci bir mutant yapılmış, kalan iki mutant ise olası RNA-bağlama bölgesine göre tasarlanmıştır. CCDC-124 proteininin parçalarının fizikokimyasal özelliklerini belirlemek için tam uzunluktaki ve güdük proteinlerin ifadeleri E. coli hücrelerinde gerçekleştirilmiş ve saflaştırılmıştır. Daha sonra saflaştırılmış proteinler çeşitli kimyasal maddelere maruz bırakılmış ve böylece proteinlerin faz ayırımı davranışına sahip olup olmadığı incelenmiştir. Elde edilen veriler ile CCDC-124 proteininin fizyolojik çalışması hakkında faydalı bilgiler elde edilmiştir.