Geobacillus stearothermophilus triaçilgliserol lipazının (GstLipC) katalitik etkinliğinin artırılması ile biyolojik ındikatörün iyileştirilmesi

Geobacillus stearothermophilus sporları, yüksek sıcaklığa karşı dirençli olup, sterilizasyon süreçlerinde biyoindikatör olarak kullanılmaktadır. Söz konusu sporların çimlenmesi, enzimlerin sıralı aktivasyonu ile ilerleyen yüksek derecede düzenlenmiş bir biyolojik süreçtir ve bu süreçte çeşitli proteinlerin önemli işlevler üstlendiği bilinmektedir. Bu çalışmada, Geobacillus stearothermophilus'ta bulunan ve spor germinasyon sürecinde kritik role sahip olan GDSL ailesi lipazının karakterizasyonu gerçekleştirildi. Elde edilen bu enzim üzerinde biyoinformatik çalışmalar ile dört farklı mutasyon çalışması yapıldı ve yaban tip GDSL lipazı ile kıyaslandı. Mutant enzimler pNW33N plazmitine klonlanarak Geobacillus stearothermophilus'a transformasyonu gerçekleştirildi. Devamında yaban tip ve rekombinant plazmiti bulunduran Geobacillus stearothermophilus için sporulasyon ve germinasyon çalışmaları gerçekleştirildi. Germinasyon kinetiği, OD600 absorbans değişimi üzerinden spektrofotometrik olarak değerlendirildi. Elde edilen bulgular, hem yaban tip hem de mutant GDSL lipazların karakterize edildiğini ve mutasyonların enzimin Km değerinde anlamlı değişimlere yol açtığını gösterdi. Ayrıca, yaban tip ve mutant sporların germinasyon süreçleri arasında belirgin farklılıklar gözlemlendi.