Haloferax alexandrinus'dan (Euryarchaeota-Archaea) asimile edici nitrat redüktaz'ın saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

Bu tezde halofilik arkeal olan H. alexandrinus'da asimile edici nitrat redüktaz (NAS) enziminin saflaştırılması ve enzimin biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi amaçlanmıştır.H. alexandrinus Nas enziminin nitrat ve metil viyolojen için Km değerleri sırasıyla 0,045 mM ve 0,0065 mM olarak bulunmuştur. Enzimin optimum pH'sı 9.5 ve optimum sıcaklığı 50 oC olarak saptanmıştır. Enzimin izoelektrik noktası 5.3 olarak belirlenmiştir. NaCl konsantrasyonun artışına paralel olarak Nas enziminin aktivitesininde arttığı gözlenmiş ve maksimum aktivitenin 3 M NaCl konsantrasyonunda olduğu belirlenmiştir.Farklı tuz konsantrasyonları ile yapılan çalışmada H. alexandrinus Nas enziminin aktivitesinin KCl ile NaCl'ye göre %100'ün üzerinde arttığı, ancak MgCl2 ve AlCl3 ile yapılan karşılaştırmada ise enzimin inhibe olduğu tesbit edilmiştir.H. alexandrinus Nas enziminin aktivitesinin siyanür, azid, EDTA ve sülfit ile azaldığı, DTT'nin ise etkilemediği tesbit edilmiştir.Saflaştırma basamaklarından sonra enzim 70 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ile yapılan çalışma sonucunda ise saflaştırılan H. alexandrinus Nas'ının moleküler ağırlığının 72±1.8 kDa ve monomer olduğu saptanmıştır