İnci kefali balığının böbrek dokusunda glutatyon s-transferaz enziminin saflaştırılması ve enzimin aktivitesi üzerine bazı kimyasalların etkilerinin araştırılması

Bu çalışmada, İnci Kefali (Chalcalburnustarichi) böbrek dokusundan GST (EC.2.5.1.18) enzimi saflaştırıldı. Saflaştırılan GST enzimi aktivitesi üzerindeki yüksek toksisiteli metil civa, bazı ağır metal iyonları ve pestisitlerin etkileri incelendi. Saflaştırma işlemi, homojenat hazırlanması ve Glutatyon-Agaroz afinite kromatografisi olmak üzere iki safhada gerçekleştirildi. Enzim aktivitesi Awasthi yöntemine göre 340 nm'de absorbans artışına göre spektrofotometrik olarak ölçüldü. Enzim, %89'luk bir verim ile 335 kat saflaştırıldı. Enzimin saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE yapıldı. Saflaştırılan enzimin her bir subsrat için Km ve Vmax değerleri çalışıldı. GSH subsratı için Km: 0,276 mM, Vmax ise 0,161 EÜ/ml olarak CDNB substratı için Km: 0,429mM, CDNB Vmax ise 0,207 EÜ/ml olarak belirlendi. Enzim aktivitesine etki eden Cu2+, Cr3+, Zn2+, Fe3+, Mg2+, Metil cıva, atrazine, diniconazole ve methomyl IC50 değerleri sırasıyla 2,4 μM-1,5 μM-0,15 mM-10 μM-63 μM-34,5 mM, 9,8 μM-1,3 μM-2,67 μM olarak bulundu.