Keçi karaciğer ve böbrek dokularından karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı metal iyonlarının, antibiyotiklerin ve avermektinlerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi

Bu tez kapsamında keçi karaciğer ve böbrek dokularından karbonik anhidraz (CA) enzimi sırasıyla 61229.29 ve 58974.33 EÜ/mg spesifik aktiviteleriyle birlikte, %55.6 ve %51.0 verimlerle Sepharose-4B-L-tirozin-sülfanilamid afinite kolon kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı. Keçi karaciğer ve böbrek dokuları CA enzimi için saflaştırma kat sayıları ise sırasıyla 359.18 ve 212.27 olarak tespit edildi. Enzimin saflığını kontrol etmek ve molekül kütlelerinin alt birim tespit etmek amacıyla SDS-PAGE yapıldı ve tek bant gözlendi. Enzimin alt birim molekül kütlesi karaciğer dokusu için 27.70 kDa ve böbrek dokusu için 28.00 kDa olarak belirlendi. Karaciğer ve böbrek dokularından saflaştırılan CA enzimi için optimum iyonik şiddet sırasıyla 0.5 M ve 0.6 M Tris-SO4 tamponu olarak belirlendi. Optimum ve stabil pH değerleri sırasıyla pH 7.5 ve 7.0 olarak belirlendi. CA enziminin optimum sıcaklık, aktivasyon entalpisi (∆H), aktivasyon enerjisi (Ea) ve Q10 değerleri Arrhenius grafiğinden elde edildi. Saflaştırılan enzimlerin Km ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk grafiklerinden hesaplandı. Keçi karaciğer ve böbrek dokuları CA enzimi kcat değerleri sırasıyla 1328.51 ve 906.66 s-1 olarak hesaplandı. Bununla birlikte, Keçi karaciğer ve böbrek dokularından saflaştırılan CA enzimi aktivitesi üzerine bazı ağır metal iyonlarının (Pb2+, Co2+, Fe2+, Hg2+, Cu2+ ve Ag+), antibiyotiklerin (amoksisilin ve vankomisin) ve avermektinlerin (moksidektin, doramektin, abamektin ve eprinomektin) inhibisyon etkileri esteraz metodu kullanılarak incelendi. İnhibisyon etkisi gösteren antibiyotik, avermektin ve metallerin IC50 ve Ki değerleri hesaplandı.