Lactarius piperatus mantarından polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve sentetik kimyada katalitik etkinliğinin incelenmesi

Bu çalışmada, polifenol oksidaz (PFO), yabani ve yenilebilir bir mantar olan Lactarius piperatus'tan, Sepharose-4B-L-tirosin-p-aminobenzoik asit afinite jeli kullanılarak, afinite kromatografisi ile saflaştırıldı ve karakterize edildi. Saf enzim elüatında PFO'ın varlığı, doğal ve SDS-poliakrilamid jel elektroforezlerinde tek bir bant halinde ortaya konuldu. Optimum PFO aktivitesi, katekol substratı kullanılarak belirlendi. Enzimin optimum pH'sı 7,0, optimum sıcaklığı ise, 20 °C olarak belirlendi. 4 °C'de 24 saat inkübe edildikten sonra L. piperatus PFO'sunun pH 3,0-9,0 aralığında oldukça kararlı olduğu gözlendi. Enzim, pH 3,0-9,0 aralığında, 4 °C'de 72 saat inkübe edildikten sonra, aktivitesini %60'ın üzerinde koruduğu tespit edildi. Enzimin ısıl kararlılık profili incelendiğinde, 4 saatlik inkübasyondan sonra, 0-50 °C aralığında oldukça kararlı olduğu gözlendi. Yapılan kinetik çalışmalar sonucunda, L. piperatus PFO'su için Km ve Vmaks değerleri, katekol substratı varlığında, sırasıyla 1 mM ve 25000 U/mg protein olarak belirlendi. PFO tarafından katalizlenen katekol oksidasyonu için elde edilen I50 değerlerine göre, askorbik asit ve sodyummetabisülfit başta olmak üzere askorbik asit, sodyum metabisülfit, sodyum azid ve benzoik asitin L. piperatus PFO'sunu inhibe ettiği gözlendi. Ayrıca bazı metal iyonlarının PFO aktivitesi üzerine farklı şekillerde etkilediği tespit edildi.L. piperatus'tan saflaştırılan PFO'nun, heptan, toluen ve diklorometan gibi organik çözücülerde, kateşin substratı kullanılması durumunda, etkili bir biyokatalizör olabileceği belirlendi.Bütün elde edilen bulgular, L. piperatus'ta bulunan difenolaz aktivitesinin, bitki polifenol oksidazlarıyla benzer özelliklere sahip olduğunu desteklemektedir.