Transcriptional control of Stim1 gene by transcription factor NEUROD2

Bazik heliks-lup-heliks transkripsiyon faktörü ailesinin bir üyesi olan Neurogenic differentiation factor 2 (NEUROD2) beyin gelişiminde önemli rol oynar. Laboratuvarımızda yapılan çalışmalar, Stim1 geninin NEUROD2'nun hedef genleri arasında ilk sıralarda olduğunu ortaya çıkarmıştır. STIM1 endoplazmik retikulum kalsiyum depolarının sensörü olarak görev yapar. Kalsiyum depo seviyeleri azaldığında, STIM1 store-operated-calcium-entry (SOCE) aktivasyonunu sağlar. NEUROD2 Stim1 geni üzerinde intronik bir elemente bağlanarak STIM1 gen ifadesini regüle eder. Tezim üç ana kısımdan oluşmaktadır. Birinci kısımda, NEUROD2'nin Stim1 intronic elemente bağlanmasının işlevlerini inceledim. NEUROD2'nin Stim1 intronik elemente bağlandığında bir represör olarak çalışmadığını buldum. Aslında, sonuçlarım NEUROD2'nin bir insulator kompleksinin parçası olarak çalıştığını önerir. İkinci kısımda, NEUROD2'nin kortikal nöronlarda SOCE üzerindeki etkisini inceledim. Sonuçlarım NEUROD2 overekspresiyonunun 5 day in vitro'da (5DIV) nöronal SOCE yanıtında bir değişikliğe neden olmadığını gösterir. Ayrıca, NEUROD2 seviyesini baskılamanın nöronal SOCE yanıtına 5 DIV'de etkisini de inceledim fakat sonuçlarım bir kanıya varmak için yetersizdi. Son kısımda, NEUROD2 bağlanma bölgesini içeren ve 4 E-box motif bulunduran Stim1 intronik elementi CRISPR-Cas9 genom editleme sistemi ile silmeyi amaçladım. Bu silinmenin etkileri incelendiğinde, Stim1 gen ifadesinin NEUROD2 regülasyonunun kortikal gelişim üzerindeki işlevleri daha iyi anlaşılabilir.