Termofilik Geobacillus thermodenitrificans TH2 suşundan glukoz izomeraz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Bu çalışmada Q-Sepharose iyon değişim kromatografisi kullanılarak termofilik bir bakteri olan Geobacillus thermodenitrificans TH2'den D-glukoz/D-ksiloz izomeraz enzimi saflaştırılmış ve karakterize edilmiştir. Saf enzim, doğal poliakrilamid jel elektroforezinde tek bir band olarak gözlenmiştir. D-glukoz substratı varlığında enzimin optimum sıcaklık ve pH'sı sırasıyla 80 °C ve 7,5 olarak bulunmuştur. Saf enzimin 4 °C ve 50 °C'deki 72 saatlik inkübasyon sonrasında pH 7,5 ve 9,0'da oldukça kararlı olduğu gözlenmiştir. Saflaştırılan enzimin ısıl kararlılık profili incelendiğinde, 50°C'de 4 gün ve 4°C'de de 4 ay kararlılığını koruduğu belirlenmiştir. Saflaştırılan enzimin Km ve Vmaks değerleri Lineweaver-Burk eğrisinden sırasıyla 32 mM ve 4,684 U/mg protein olarak hesaplanmıştır. Ayrıca, bazı metal iyonları varlığında, enzim aktivitesinin değişik oranlarda etkilendiği gözlenmiştir. Sonuç olarak, G. thermodenitrificans TH2'den saflaştırılan D-glukoz izomerazın literatürle uyumlu özelliklere sahip olduğu tespit edilmiştir.