Eczacılık Farmakoloji Anabilim Dalı

Farelerde oluşturulan enflamatuvar hiperaljezi modelinde çözünebilir epoksit hidrolaz inhibisyonunun etkisinin NLRC4 inflamazomu ve antienflamatuvar NLRC3 ile ilişkilendirilerek araştırılması

Bu tezde, lipopolisakkarit (LPS) ile farelerde oluşturulan enflamatuvar hiperaljezi modelinde çözünebilir epoksit hidrolaz (çEH) inhibisyonunun etkisinin mekanizmasının pro-enflamatuvar klasik nükleotit bağlayıcı oligomerizasyon alanı reseptör C (nucleotide binding oligomerization domain-like receptor C; NLRC) 4/apopitozla ilişkili nokta benzeri protein içeren bir kaspaz biriktirici alan (apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain; ASC)/pro-kaspaz-1 inflamazomu ile klasik olmayan kaspaz-11 inflamazomu ve antienflamatuvar NLRC3 ile ilişkilendirilerek araştırılması amaçlanmıştır. Deneyler 9 gruba ayrılan fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir: (1) Serum fizyolojik (SF), (2) LPS, (3) SF+dimetil sülfoksit, (4) LPS+triflorometoksifenil-3-(1-propiyonilpiperidin-4-il)üre (trifluoromethoxy-phenyl-3-(1-propionylpiperidin-4-yl)urea; TPPU) (0.3 mg/kg), (5) SF+TPPU (0.5 mg/kg), (6) LPS+TPPU (0.5 mg/kg) ve (7) LPS+TPPU (1 mg/kg). TPPU (4 ml/kg) SF (10 ml/kg) veya LPS (10 mg/kg; 10 ml/kg) ile aynı anda intraperitoneal yoldan uygulanmıştır. Farelerin 30 saniye içinde termal uyarıya tepki verme süreleri SF veya LPS enjeksiyonundan 6 saat sonra değerlendirilmiştir. Deneyler sonunda öldürülen farelerin beyinleri ve omurilikleri alınmıştır. Beyinler ve omuriliklerden hazırlanan doku homojenatı süpernatantlarında β-tübülin, NLRC4, ASC, kaspaz-1 p20, kaspaz-11 p20, interlökin (interleukin; IL)-1β ve NLRC3 ekspresyonu immunoblotting yöntemiyle, 14,15-dihidroksieikozatrienoik asit (14,15-DHET) ve IL-1β düzeyleri ise uygun enzyme-linked immunosorbent assay kitleri kullanılarak ölçülmüştür. Farelerin termal uyarıya yanıt verme sürelerinde LPS'nin neden olduğu azalma yalnızca 0.5 ve 1 mg/kg dozlarda çEH inhibitörü TPPU ile önlenmiştir. TPPU etkili olan en düşük dozunda (0.5 mg/kg) uygulandığında, LPS'nin neden olduğu 14,15-DHET ve IL-1β düzeyleri ile NLRC4, ASC, kaspaz-1 p20, kaspaz-11 p20 ve IL-1β ekspresyonundaki artmanın yanı sıra, NLRC3 ekspresyonundaki azalma önlenmiştir. Bu bulgular, TPPU ile çEH inhibisyonunun LPS'nin neden olduğu enflamatuvar hiperaljeziyi önleyici etkisine santral sinir sisteminde pro-enflamatuvar klasik NLRC4/ASC/pro-kaspaz-1 ile klasik olmayan kaspaz-11 inflamazomunun oluşumundaki/etkinliğindeki azalmanın yanı sıra, antienflamatuvar NLRC3'ün ekspresyonundaki artmanın katkıda bulunabileceğini düşündürmüştür.