Armillaria mellea mantarından beta-glukozidaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

Bu çalışmada, Trabzon'un Hıdırnebi Yaylası'ndan toplanan Armillaria mellea makromantarından, ß-glukozidaz enzimi, iyon değişim kromotografisi ile kısmi olarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. Farklı pH değerlerine sahip tamponlar kullanılarak hazırlanan ham özütlerde ß-glukozidaz aktivitesi araştırıldı ve ekstraksiyon için uygun tampon belirlendi. Hazırlanan ham özütte ve iyon değişim kromotografisi sonrası elde edilen eluatlardan, ß-glukozidaz varlığı, doğal poliakrimalid jel elektroforezi ve substrat boyaması ile ortaya konuldu. Ham özütte üç bandın varlığı gözlenirken, iyon değişim kromotografisi sonrası elde edilen çözeltide iki bandın varlığı gözlendi. Kısmi olarak saflaştırılan enzim biyokimyasal olarak karakterize edildi. Enzimin optimum pH'sı 4,0, optimum sıcaklığı ise 50 °C olarak belirlendi. 4 °C'de 24 saat inkübasyondan sonra A. mellea ß-glukozidazının pH 3,0-6,0 aralığında ve pH 8,0'de oldukça kararlı olduğu gözlendi. Enzimin ısıl kararlılık profili incelendiğinde, 1 saat inkübasyondan sonra, 20-50 °C aralığında oldukça kararlı olduğu gözlendi. ß-glukozidaz enzimi için Vmaks ve Km değerleri, p-nitrofenil-ß-D-glukopiranozid (pNPG) substratı varlığında sırasıyla 3,646 U/mg ve 0,295 mM olarak bulundu. Ayrıca bazı metal iyonları ve kimyasal maddelerin enzim aktivitesini farklı şekillerde etkilediği tespit edildi.