Development of a novel in vitro screening method using genetically modified NK-92 cells against various tumor cells

Doğal bağışıklık sisteminin doğal öldürücü (NK) hücreleri, tümor hücrelerini güçlü bir şekilde öldürme kabiliyetleri ile tanınırlar. NK hücre aracılı öldürme, ligand bağlanması ile efektör fonksiyonları tetiklenen veya baskılanan birçok aktivasyon ve inhibisyon reseptörleri arasındaki karmaşık denge ile korunur. Bu çalışmada reseptöre özgül anti-tümör yanıtlarını tanımlamak için hücre bazlı bir tarama aracı geliştirerek bu karmaşık dengeyi incelemeyi hedefliyoruz. Heterojen tümör hücre popülasyonlarının karakteri hastalar arasında farklılık gösterdiği için böyle bir araç hastaya özel kanser immünoterapilerinin geliştirilmesinde yararlı olabilir. 20 farklı NK hücre yüzey reseptörünü kodlayan genler, NK-92 hücre hattının genetik modifikasyonu için lentiviral vektörlere klonlanmıştır. Genetik olarak modifiye edilmiş (GM) NK-92 hücreleri saflaştırılmış ve tek bir özgül reseptörü yüksek düzeyde ifade ettikleri akan hücre ölçer ile doğrulanmıştır. Tüm GM NK-92 hücrelerinin efektör fonksiyonları insan kanser hücre hatlarına ve sarkom hastalarından elde edilen tümör hücrelerine karşı analiz edilmiştir. Sonuçta, yapılan genetik değişikliklerin GM NK-92 hücrelerinin sitotoksik kapasitelerine zarar vermediği ve hatta DNAM-1 ve NKG2D gibi reseptörler aracılığıyla arttırılmış bir tümör hedeflenmesini tetiklediği gözlemlenmiştir. Ayrıca, bloke edici antikorlar kullanılarak bu cevabın DNAM-1 ve NKG2D kaynaklı olduğu doğrulanmıştır. Ek olarak, DNAM-1 ve NKG2D'yi birlikte ifade ederek degranülasyon ve sitotoksisiteyi tetiklemede ön plana çıkan reseptörlerin sinerjik tepkisi de değerlendirilmiştir. Sonuçlarımız, farklı aktivasyon reseptörlerini ifade eden genetik olarak modifiye edilmiş NK hücrelerinde yanıt üreten reseptörleri tanımlamak için in vitro genetik tarama yaklaşımının uygulanabilirliğini göstermektedir. Bu araç, adoptif kanser immünoterapisinde kullanılabilecek hastaya özgül hedeflerin hızla belirlenmesini sağlama potansiyeline sahiptir.