Hematopoietik kök hücrelerin ex vıvo çoğaltılmasında hematomir teknolojilerin geliştirilmesi

Hematopoietic kök hücre (HKH) trasplantasyonu, birçok hematopoietik hastalığın tedavisinde kullanılan temel terapötik yöntemdir ve az sayıda bulunan HKH'lerin tüm kan hücrelerini repopüle etmesi yeteneğiyle sağlanır. Uygun donörün sınırlı bulunmasının yanı sıra, yeterli sayıda donör HKH duyulan ihtiyaç klinik açıdan önemini korumaktadır. Bu sorun, HKH'lerin ex vivo çoğaltılmasıyla ele alınsa da sınırlı başarı sağlamaktadır ve HKH'lerin çoğaltılmasını sağlayabilecek alternatif stratejilerin geliştirilmesi gerekmektedir. Bu nedenle, HKH spesifik in vivo nakavt edilmiş yaklaşık 200 geni inceledik ve genlerin işlev kaybı fenotiplerini belirledik. Bu genlerden 57'si en az bir buçuk kat kök hücre havuzunu artırmıştır. Ayrıca, bu hematopoietic faktörlerin 3'UTR bölgesini hedefleyen sekiz miRNA kök sekansları, tahmin algoritmaları kullanarak belirlenmiştir. HKH dormansı faktörlerini hedefleyen ve HKH'lerin ex vivo çoğaltılmasını sağlayabilecek, RNA interferans temelli teknoloji olan HematoMiR'leri geliştirmeyi amaçladık. HKH'lerin dormansisinde yer alan 50'den fazla faktörü hedefleyen HematoMiR'ler, etkili biçimde ex vivo murin ve insan HKH'lerin çoğaltmasını sağlamaktadır. HematoMiR-5 ile ex vivo çoğaltılmış HKH'lerin hücre döngüsüne girişinin arttığı ve HKH yaşlanması göstermeden, negative hücre döngüsü düzenliyiclerinin gen ekspresyonlarını da azaltarak artan hücre döngüsü göstermiştir. HematoMiR-5, HKH'lerin kendini yenileme kabiliyetlerinin sürdürmüş ve apoptoz oranında değişilik olmamasını sağlamıştır. HematoMiR-5 ex vivo çoğlatılmış HKH transplantasyonu, alıcı hayvanlarda başarılı engraft ve repopülasyon kapasitesi göstermiştir. HematoMiR-5 ile hematopoietik faktörlerin susturulması, aşırı ROS üretimine yol açmamış ve oksidatif strese bağlı genlerin expresyonunu azaltmıştır. HematoMiR-2 ve HematoMiR-5 ile muamele edilen murin HKPH'ler, aktif hücre döngüleri boyunca DNA hasarını azaltmıştır. Ayrıca, seçilmiş HematoMiR'lerin farklı kombinasyonel karışımları, etkin ex vivo HSC çoğaltılması için belirlenmiştir. Sonuçlarımız, HematoMiR teknolojisinin HKH dormansı modülatörlerini sekansa bağlı regülasyon yaparak HKH ex vivo çoğaltılmasının sağladığını göstermektedir. Bu çalışma ICGEB tarafından CRP/TUR15‐02_EC numaralı proje ile desteklenmiştir.