CMT4B1 drosophila modelinin geliştirilmesi ve moleküler analizleri

Charcot-Marie-Tooth (CMT) hastalığı çevresel sinir sisteminin en sık görülen hastalığıdır. Bu hastalıkla ilişkilendirilen yaklaşık 40 gen arasında, MTMR2 mutasyonları CMT4B1 alt tipi olarak sınıflandırılmıştır. Bu genin protein ürünü, fosfatidil inositol (PI) metabolizmasında yer alan fozfatazlar olan myotubularinlere aittir. Bu çalışmanın amacı mutant MTMR2?nin hastalık mekanizmasındaki etkisini araştırmak amacıyla CMT4B1 için Drosophila modeli geliştirmektir. Öncelikle, MTMR2?nin sinek homoloğu olan mtm?in mevcut olan kısmi delesyonlu mutant sinekleri, nöromusküler morfoloji ve fonksiyon bağlamında, sırasıyla immünohistokimya ve FM 1-43 boya alımı testleriyle analiz edilmiştir. Nöromusküler bağlantılar ve nöronların uçlarının kaslarla yaptığı yuvarlak bağlantılar olan butonlar incelenmiştir. Üçüncü evredeki mutant larvaların normalde görülmeyen fazla sayıda uydu butonlara ve buton altı yapılara sahip olduğu gözlemlenmiştir. Aynı zamanda, immunohistokimya analizlerinde mtm anlatımının bütün organizmada ya da sinirlerde RNAi yöntemi ile seçici azaltılması sonucu da uydu butonları göstermiştir. İkinci olarak, mtm?in sineklerde kesin delesyonunu yaratmak ve daha sonra mtm?in herhangi bir genle değişimini sağlayabilmek için hedefleme vektörü ve integraz aracılığıyla gen silinmesi yöntemi (IAGSY) kullanılmıştır. Bu çalışmada, mtm-hedefleme vektörü, mtm?in alt ve üst bölgelerinin pP{White-STAR} vektörüne klonlarak hazırlanmıştır. Üçüncü kromozom hedef olarak seçilmesine rağmen, vektör X kromozomuna rastlantısal olarak entegre olmuştur. Hedefleme vektörü bu sineklerde mobilize edilmeye çalışılmış, ancak rekombinant sinek gözlenmemiştir. mtm-eksik sinekler elde etmek için daha fazla sinek taranmalıdır. Bu sinekler elde edildiğinde yabanıl tip MTMR2 ve CMT?ye sebep olan mutant MTMR2, mtm?in konumuna yerleştirilerek CMT hastalığına ve MTMR2?ye bağlı nörodejenerasyona sebep olan moleküler mekanizmalara ışık tutulabilecektir.