Fibrin matris üzerinde primer keratinosit hücre kültür yönteminin geliştirilmesi

Majör yanık vakalarında kültüre epitel greftlerinin kullanımı hayat kurtarıcı bir alternatiftir. Keratinosit hücreleri, uygun koşullar sağlandığında çoğalma, bir epi- tel tabakası oluşturma ve dermal bir ikame olarak simüle etme yeteneğine sahiptir. Ancak kültür yöntemiyle üretilen bu tabaka frajil yapısı nedeniyle cerrahi uygula- mada zorluklar yaratır. Bu çalışmada biyouyumluluk, toksik olmama, biyobozunurluk ve hücre kültürüne uygunluk açısından sunduğu avantajlar nedeniyle taşıyıcı tabaka olarak biyopolimer fibrin matrisi kullanıldı. Fibrin üretmek için gönüllülerden taze donmuş plazma (TDP) alınmış ve CaCl2 solüsyonu ile TDP'nin pıhtılaşması sağlandı. İkinci aşamada, otolog hücre kültürü yöntemi oluşturmak için doğrudan insan derisin- den bir primer keratinosit kaynağı elde edildi. Abdominal pannikülektomi ameliy- atı geçirmiş gönüllülerden deri örnekleri alınıp keratinosit izolasyonu yapıldı. Fibrin oluşumu ve keratinosit hücrelerinin izolasyonundan sonra, fibrin matris yüzeyine ker- atinosit hücreleri ekildi. Fibrin matris iskelesinin oluşumu ve bu iskele üzerinde primer hücre kültürünün uygulanabilirliği incelendi ve bir yöntem oluşturuldu. Polimerize fibrin yapısının kimyasal bağlarını gözlemlemek için Fourier Transform Infrared Spek- troskopisi (FT-IR) ile analizi yapıldı. Hücre izolasyonunun başarısı, hücre kültürü ve fibrin iskelenin etkisi ışık mikroskobunda, taramalı elektron mikroskobunda (SEM) ve pan-sitokeratin boyama ile gösterildi. Keratinosit kültürünün hücre tutunumu, tara- malı elektron mikroskobu (SEM) ile incelendi. Bu tezde insan kanından fibrin matris oluşumu, insan derisinden keratinosit hücre izolasyonu ve kültürü ve fibrin üzerinde keratinosit kültürü yöntemleri geliştirildi.