Eş zamanlı beta-laktamaz inhibitör protein ekspresyonunun hücresel beta-laktamaz aktivitesine olan etkisi

Beta-laktam antibiotikleri bakteriyel enfeksiyonların tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Ancak, beta-laktam antibiotiklerinin yetersiz ve yanlış kullanılmasına bağlı olarak, bakterileriler beta-laktam antibiotiklerini etkisiz hale getirecek mekanizmalar geliştirmiştir. En sık görülen mekanizma, beta-laktam halkasını hidroliz eden ve bakteriye antibiyotik direnci kazandıran TEM-1 beta-laktamaz üretimidir. 165 amino asitten oluşan beta-laktamaz inhibitör proteini (BLIP) Streptomyces clavuligerus tarafından üretilen, yüksek ilgiye sahip bir beta-laktamaz inhibitörüdür. Bu çalışmada, BLIP'in inhibitor etkisi, hücrelerin büyüme profilleri, canlı hücre sayısı ve eşzamanlı beta-laktamaz ile BLIP üreten rekombinant hücrelerdeki beta-laktamaz aktivitesi incelenilerek araştırıldı. Canlı hücre başına beta-laktamaz aktivitesi BLIP varlığında ve yokluğunda belirlendi. BLIP ile beta-laktamaz varlığı SDS-PAGE ve Native-PAGE analizleri ile doğrulandı. BLIP yokluğunda, E. coli BL21(DE3) (pUC18 + pET-26EA) ve E. coli BL21(DE3) (pUC18 + pET-26b(+)) hücreleri benzer düzeyde ß-laktamaz aktivitesi göstermişlerdir. Eşzamanlı BLIP ve R-TEM-1 beta-laktamaz ekspresyonu gerçekleştiğinde, periplasmadaki beta-laktamaz aktivitesi önemli oranda düşmüştür.