Helicoverpa armigera single nükleopolihedrovirüs orjinli kitinaz ve katepsin proteinlerinin Chilo iridescent virüs'ün virülansına etkileri

Chilo iridescent virüs (CIV) tarımda zararlı bazı böcekleri enfekte ettiği için ekonomik ve ekolojik olarak özel bir öneme sahiptir. Fakat, CIV enfekte ettiği konaklarda düşük virülans oluşturmaktadır. Bu durumun nedenleri arasında birçok böcek virüsünün sahip olduğu ancak CIV'de olmayan kitinaz ve katepsin genlerinin bulunmaması gösterilebilir. Bakülovirüslerde bulunan kitinaz, virüs replikasyonunun geç fazında katepsin ile birlikte ifade edilir. Katepsinin peritrofik membranın yapısını bozarak, kitinazın ise kitin tabakasını tahrip ederek böcek üzerinde etkili olduğu bilinmektedir. Bu bilgiler ışığında, bu çalışmada bakülovirüslere ait kitinaz ve katepsin proteinleri kullanılarak CIV'nin virülansının arttırılabilmesi hedeflenmiştir. Bu doğrultuda, ilk önce kitinaz ve katepsin proteinlerinin bakteriyal ifade sisteminde üretilmeleri ve elde edilen proteinlerin böceğe yedirildikten sonra CIV virülansına etkilerinin araştırılması hedeflenmektedir. Bakülovirüs genomundan kitinaz ve katepsin genleri uygun primerler kullanılarak polimeraz zincir reaksiyonuyla (PCR) çoğaltıldı. Çoğaltılan genler pJET1.2 vektörüne klonlandı. Gerekli doğrulamalar yapıldıktan sonra, her iki gen ayrı ayrı pET28a+ ifade vektörüne aktarılarak Escherichia coli BL21(DE3) hücresinde ifadeleri sağlandı. Kitinaz (64 kDa) ve katepsin (43 kDa) proteinleri SDS-PAGE ve western blot analiz yöntemleriyle belirlendikten sonra, nikel afinite kromatografisi ile saflaştırıldılar. Elde edilen proteinlerden 500 ng, 1000 ng, 1500 ng, 2000 ng, 2500 ng, 5000 ng konsantrasyonlarında Galleria mellonella larvalarına yedirildikten sonra CIV ile enfekte edildiler. Bu çalışma neticesinde, bakülovirüse ait kitinaz ve katepsin proteinlerinin CIV'nin virülansını % 23 arttırdığı tespit edildi. Buna göre bakulovirüs kitinaz ve katepsin proteinlerinin CIV'nin virülansını artırmak amacıyla kullanılabileceği belirlendi.