Recombinant production of GLP-1 analogue using escherichia coli host organism

Diyabet, obezite, hipertansiyon ve kardiyovasküler hastalıklarla ilişkilendirilen en ciddi metabolik bozukluktur. Özellikle Tip II Diyabet'in yüksek prevalansı, buna karşı yeni ilaç geliştirme ihtiyacını işaret etmektedir. Geliştirilen ilaçlarda öncelikle daha yüksek verimlilik ve daha az yan etki hedeflenmektedir. Rekombinant protein temelli biyoteknolojik ilaç molekülleri bu amaç için umut vericidir. Özellikle GLP-1 analogları, kendi kendini sınırlayan mekanizmaları ve insülinotropik etkileriyle bilinmektedir. Bu çalışmada, rekombinant E. coli kullanılarak artırılmış stabilite ve verimliliğe sahip yeni bir GLP-1 analoğu üretilmiştir. Ekspresyon plazmidi, restriksiyon-ligasyon yöntemi ile oluşturulmuş ve tüm plazmit dizilimi ile doğrulanmıştır. Daha sonra, GLP-1 analoğunun verimini en üst düzeye çıkarmak için optimize edilmiş lizis, büyüme ve ekspresyon koşulları izlenerek çeşitli E. coli suşlarına transform edilmiştir. Ön indüksiyon süresi, indüksiyon noktası, indüksiyon IPTG konsantrasyonu ve indüksiyon sonrası sıcaklık gibi çeşitli parametreler, maksimum verimle başarılı ifade için test edilmiştir. Sonuç olarak, E. coli BL21(DE3) suşu, 0.6 OD600nm'de 0.2 mM IPTG indüksiyonu ve 18 °C'de gece boyunca indüksiyon sonrası büyümenin en verimli koşullar olduğu sonucuna ulaşıldı. Bu koşullar altında hedef protein GLP-1 analoğu, çözünmeyen fraksiyon halinde elde edildi. Protein analizi ve saflaştırmanın ardından kantifikasyon yapıldı ve GLP-1 analoğunun en yüksek titresi 626 µg/ml olarak ölçüldü. Gelecekteki beklentiler olarak, başka bir konak organizma kullanmak ve büyüme koşullarını değiştirmek, hedef proteinin çözünür formda elde edilmesini sağlayabilir. Anahtar kelimeler: T2DM, GLP-1 analoğu, rekombinant DNA teknolojisi, protein ekspresyonu, E. coli