Drosophila'da IroC genlerinin CRISPR/Cas yöntemi kullanılarak mutantlarının ve endojen ifadelerinin analizi için etiketlenmiş proteinlerinin oluşturumlası

Koku sisteminde, doğru koku reseptör nöronu (ORN) gelişimi, uygun koku reseptör (OR) gen ifadesine ve aksonların daha yüksek beyin merkezlerine uygun şekilde projeksiyonuna bağlıdır. Bu nedenle, gelişim sırasında, ORN'ler iki önemli karar alır: büyük bir OR gen repertuarından bir OR genini seçmek ve aksonlarını beyinde belirli bir yere iletmek. Genetik aletlerin mevcudiyeti ve nispi sadeliği Drosophila'yı koku sisteminin moleküler temelini ortaya çıkarmak için önemli bir model organizma haline getirmektedir. Çalışmalarımız, bir transkripsiyon faktör ailesi olan IroC'nin (Iroquois kompleksi) ORN spesifikasyonundaki fonksiyonu üzerine odaklanmaktadır. Iro ailesi, tüm çok hücreli organizmalarda kümeler halinde korunmuştur ve araucan (ara), caupolican (caup) ve mirror (mirr) adı verilen üç gen içerir. Transkripsiyon hızlandırıcı tuzak hatlarının önceki analizi, IroC'nin iki koku organında, antenlerde ve maksiller palpta ifade edildiğini göstermiştir. üçlü mutant sinekler kullanılarak RNA sekanslama analizi yapılmış ve koku sistemindeki iroC hedef genlerini karakterize edilmiştir. Bu çalışma çerçevesinde IroC genlerini ayrı ayrı araştırmak için CRISPR/Cas9 teknolojisini kullanarak yeni sinek hatları üretildi; IroC genleri için tekli mutantlar ve iroC'nin etiketli proteinleri. Tekli IroC mutantları, hedef genlerin ne kadarının çakıştığını belirlemek için, gelecekteki çalışmalarda RNASeq analizi yapılması amacıyla tarafımdan üretildi. Ayrıca, endojen ifade şablonlarını incelemek için floresan etiketli tekli iro proteinleri tarafımdan üretildi. Genel olarak, üretilen araçlar iroC fonksiyonunu incelemeye ve bu proteinlerin koku alma sistemindeki rolünü netleştirmeye yardımcı olacaktır.