Glutatyon redüktaz enziminin koyun kalp dokusundan saflaştırılması ve karakterizasyonu

Glutatyon redüktaz (GR; E.C.1.8.1.7), GSSG'nin GSH'a indirgenmesini katalizleyen bir enzim olup flavin koenzimi (FAD) ve piridin-nükleotide (NADPH) bağımlı disülfit oksidoredüktaz ailesinin bir üyesidir. Bu çalışmada glutatyon redüktaz enzimi koyun kalp dokusundan saflaştırıldı. Bu saflaştırma işleminde %30-70 arası amonyum sülfat çöktürmesi ve 2', 5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi yöntemleri uygulandı. 5,35 EÜ/mg. protein spesifik aktivitesine sahip olan GR enzimi %72,82 verimle 191 kat saflaştırıldı. SDS-PAGE yöntemi ile enzimin saflık derecesi kontrol edildi ve denatüre edici şartlarda molekül kütlesi yaklaşık olarak 70 kDa bulundu. Karakterizasyon çalışmalarında ise enzimin optimum pH, stabil pH, optimum iyonik şiddet ve optimum sıcaklık değerleri sırasıyla 6,0 (0,1 M KH2PO4 tamponunda), 8,0 (0,1 M KH2PO4 tamponunda), 240 mM (0,1 M KH2PO4) ve 70°C olarak bulundu. Ayrıca NADPH ve GSSG substratları için KM ve Vmax değerleri için sırasıyla 7,776 mM, 0,1678 EÜ/mL ve 0,593 mM, 0,0306 EÜ/mL olduğu belirlendi.