Crıspr cas9 proteininin ana sumolasyon bölgesinin tanımlanması

CRISPR / Cas9 sistemi, prokaryotik organizmalarda antiviral savunma olarak çalışan bir tür adaptif bağışıklık sistemidir. Ökaryotik sistemlere gen düzenleme aracı olarak adapte edildiğinden beri, CRISPR en popüler genetik mühendisliği teknolojilerinden biri olmuştur. Moleküler biyoloji ve tıp alanlarında yapılan gen tedavisi, ilaç tasarımı, epigenom düzenlemesi vb. çeşitli uygulamalar, bu teknolojiyi daha da keşfedilmeye değer kılmıştır. Daha spesifik ve etkili bir gen hedefleme sistemi kurmak için, CRISPR yolağının, özellikle bu sistemin asıl oyuncusu olan Cas9 enziminin (CRISPR ile ilişkili protein 9) nasıl düzenlendiğini öğrenmek elzemdir. Mevcut laboratuvar üyesi tarafından sağlanan ve güçlü şekilde desteklenen verilerin ışığında, Cas9'ın SUMO-1 ve SUMO-2 proteinleri tarafından kovalent olarak modifiye edildiği ortaya çıkmıştır. Bu, Cas9'ın uğradığı gösterilen ilk post-translasyonal modifikasyondur. Bu çalışma kapsamında, Cas9 proteininin ana sumolasyon bölgesini tanımlamayı ve sumolasyonu engellenmiş bir Cas9 mutantı üretmeyi amaçladık. Bu amaçla, bir dizi yönlendirilmiş mutajenez deneyi yapılmıştır. Sonuç olarak, Cas9 proteini üzerinde bulunan 10 sumolasyon motifi için 10 adet tekli mutant ve bu 10 sumolasyon motifin 10 unun da yok edildiği 11. bir mutant üretildi.