Reconstitution of the partial tail module of the human mediator complex

RNA Polimeraz II (Pol II), protein kodlayan genlerin transkripste ederek hücrenin her aktivitesini düzenler. Protein kodlayan genlerin transkripsiyonu, kalibre edilmiş bir yanıt oluşturan Pol II'ye giden dışsal ve içsel sinyallere bağlıdır. Çevresel ve genetik faktörler yoluyla kalibre edilmiş yanıtın bozulması, kanser dahil birçok hastalık fenotipinin kaynağıdır. Bu içsel ve dışsal sinyaller, Mediator Kompleksi aracılığıyla Pol II'ye iletilir. Mediatör Kompleksi, hücrenin tüm süreçlerinin düzenlendiği Pol II tarafından üretilen transkripsiyonel yanıta aracılık etmek için aktivatörlerden ve baskılayıcılardan gelen sinyalleri ileten 30 alt birimli bir 2-MDa boutundaki bir protein kompleksidir. Mediator Kompleksi, baş orta kinaz ve kuyruk adındaki 4 modülden oluşur. Mediatör kompleksinin kuyruk modülü, 7 proteinden oluşmakta olup aktivatörlerle doğrudan etkileşimleri yoluyla mediatörü akış yukarı aktive edici dizilere çağırır. Bu nedenle Mediatörün kuyruk alt biriminin yeniden yapılandırılması, Mediatörün Pol II'yi düzenlemesini ve aktivatörlerin hücrede transkripsiyonel tepkilere nasıl neden olduğunu mekanik olarak anlamak için gereklidir. Multibac ekspresyon sistemi aracılığıyla, her bir kuyruk alt birimini ve aracının kısmi bir kuyruk kompleksini oluşturduk. Verilerimiz, Med16-Med23-Med24-Med25'in, Mediator'un mimari iskelesi olan Med14'ün yokluğunda her proteinin kuyruk alt birimi Med16 ile doğrudan etkileşimleri vasıtasıyla bir 4 proteinden oluşan bir alt kompleks oluşturduğunu göstermektedir Med14'ün varlığı, Med25'in bu alt komplekste olmamasına neden olmakta ve Med14-Med16-Med23-Med24'ten oluşan alt kompleks, her bir alt birimin Med16 ile doğrudan etkileşimi yoluyla yeniden oluşturulur. Kuyruk modülünün geri kalan 3 alt birimini Med15 Med27 ve Med29, gerçekleştirilen herhangi bir immünopresipitasyonda etkileşmedikleri için kalan 4 alt birimden ayrı olduğu gözlenmiştir. Sonuçlar genel olarak kısmi bir kuyruk modülünün kurulduğunu önermektedir. Tam bir kuyruk modülünün saflaştırılması, ek Mediatör Kompleksi proteinleri gerektirebilir.