ASC zerresi oluşumunda yer alan pyd ve card bölgelerinin homotipik etkileşimlerinin incelenmesi

Apoptoz-ilişkili zerrecik-benzeri CARD içeren protein (ASC), ölüm bölgesi ailesine ait korunmuş PYD ve CARD alanlarını içeren 22 kDa büyüklüğünde bir proteindir. Alanlar arasındaki homotipik etkileşimler, en az üç belirli temas yüzeyinin (Tip I, II ve III) etkileşimiyle meydana gelir. PYD ve CARD homotipik etkileşimleri yoluyla ASC zerreciği oluşur. ASC, enflamasyon sürecinde reseptör ve efektörler arasında adaptör role sahiptir. Kesilmiş olarak PYD ve CARD şeklinde ayrı ayrı ifade edildiğinde, bu alanlar filamentli yapılar oluşturur. Bu filamentler, yabanıl tip ASC polimerizasyonu sırasında birbirlerine yakınlaşmaktadır. Bu çalışmada amacımız, polimerizasyon sırasında önemli noktaların PYD-PYD ve CARD-CARD etkileşim yüzeyleri üzerindeki etkilerini ortaya koymaktır. 19 tekli, 22 ikili mutasyonun, E13A, D48A, Y60A, E130A, Y146A, R150A ve M159A gibi önemli noktalara tanıtılarak, aynı anda bir veya iki etkileşim yüzeyinin zarar görmesinin etkileri gözlemlendi. Mutasyonların etkileşim fenotipinde meydana getirdiği etkiler, organizasyon seviyesindeki değişikliklerin floresan ve konfokal mikroskopi kullanılarak gözlemlenmesi ile değerlendirildi. Yıkıcı mutasyonların varlığında etkileşim oranlarındaki değişimleri ölçmek için, mutant setler FRET tekniği ile analiz edildi ve homooligomerizasyon miktarlarındaki değişiklikler hesaplandı. Sonuçlarımız, CARD bölgesinin, etkileşim yüzeylerindeki mutasyonlara daha az tolerans göstermesine rağmen, homooligomerizasyonu bozduğu bilinen PYD mutantlarının, yabanıl tipteki varyantlarıyla birlikte ekspres edildiğinde multimerik filamentli yapılara katıldığını gösterdi. FRET sinyalini artıran, azaltan veya bloke eden bazı mutasyonlar belirlendi. Çalışmamız, enflamazom kompleksinin oligomerizasyon dinamikleri hakkında daha net açıklamalar ve yeni görüşler sağlamaktadır.