NLRP13'ün hücre ölümündeki görevinin araştırılması

NLRP13, NOD benzeri resept¨or ailesine dahil olan hÜcre içi bir proteindir. N terminal PYRIN bölgesi, NACHT bölgesi ve lösin bakımından zengin tekrarları, LRR'yi içerir. Stabil olarak NLRP13 eksprese eden THP1 hücrelerinde, LPS/ATP uygulaması ve P. Aeruginosa enfeksiyonu daha y¨uksek bir pro-inflamatuar yanıtı indükledi. Ayrıca, stabil NLRP13 eksprese eden THP-1 h¨ucresinde procaspaz-8 aktivasyonunun nispeten arttığı ortaya cıktı. NLRP13, Co-IP sonuçlarına göre kaspaz-8 ile etkileşime sahiptir. Bunların yanı sıra, NLRP3, kaspaz-1 ve ASC gibi NLRP3 inflamatuar bileşenleri, inflamatuar aktivasyon üzerine stabil NLRP13 eksprese eden THP-1 hücresilerinde önemli ölçüde daha yüksektir. Bu tez ¸çalışması, NLRP13'ün inflamatuar aktivasyon sonrası kaspaz-8 aktivasyon kompleksi yoluyla hücre ölümünde rolü olup olmadığını araştırmayı amaçlamıştır. Bunu açıklamak için, THP-1 hücrelerinde inflamatuar aktivasyon yoluyla piroptoz indüksiyonundan sonra Annexin V-PI boyama ve LDH salınım deneyi yapıldı. Stabil olarak NLRP13 eksprese eden THP-1 hücreleri, yabanıl tip hücreler ve kontrol hücreleri arasında ¨önemli bir fark gözlenmedi. Ayrıca tüm gruplar için gasdermin D ve PARP-1 proteinlerinin kesilimi kontrol edildi. Gasdermin D kesilimi her grup için benzer olarak gösterilirken, stabil NLRP13 eksprese eden THP-1 hücrelerinde PARP-1 kesilimi kontrolden nispeten daha yüksekti. Her grupta kaspaz-8 inhibe edildikten sonra deneyler tekrarlandı. Annexin V-PI boyamasında, LDH salınım tahlilinde ve gasdermin D bölünmesinde ¨önemli bir fark yoktu. Bununla birlikte, kaspaz-8 inhibe edildiğinde, stabil olarak NLRP13 eksprese eden THP-1 hücrelerinde PARP-1 bölünmesi biraz azaldı.NLRP13'¨un kaspaz-8 aktivasyon kompleksinin ind¨uklenmesi yoluyla doğrudan piroptozda yer almadığı gösterilmiştir; ancak kaspaz-8 aktivasyon kompleksi ile apoptoz ve piroptoz arasındaki moleküler geçiş mekanizmasında yer alabilir.