Jiangella aurantiaca enkapsülin sisteminin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu

Enkapsülinler, kendilerine özgü kargo proteinleri bulunan, doğal, bakteri kaynaklı ve protein yapılı kapsüllerdir. Bu çalışmada, Jiangella aurantiaca 8K307'nın peroksidaz-enkapsülin sistemi karakterize edildi. Ayrıca, enkapsülinle ilişkisiz Anoxybacillus ayderensis A9'in oligo-1,6-α-glukosidazına, Dyp'ye ait olan kargo yükleme peptidi (CLP) eklenerek, enkapsülinin oligo-1,6-α-glukosidaz üzerindeki etkileri araştırıldı. Enkapsülin, Dyp, oligo-1,6-α-glukosidaz ve CLP etiketli oligo-1,6-α-glukosidaz genleri, rekombinant olarak üretildiler ve gen ekspresyonlarının ardından saf olarak elde edildiler. Enkapsülinin TEM ve DLS analizleri ile 24 nm'lik kapsül yapısı belirlendi. Kapsül formun stabil olduğu fizyolojik koşullar belirlendi. Enkapsülinin, Dyp ve CLP etiketli oligo-1,6-α-glukosidaz ile in vitro kapsülasyonları sağlandı. Zimogram ve Native PAGE analizleri ile kapsülasyonlar tespit edildi. Enkapsülinlenen ve serbest Dyp, enkapsülinlenen ve serbest oligo-1,6-α-glukosidaz ve CLP etiketi bulunmayan oligo-1,6-α-glukosidazın, optimum pH, optimum sıcaklık ve kinetik parametreleri belirlendi. Sürfaktanlar, metal şelatörler, indirgeyici ajanlar, organik çözücüler ve metallerin Dyp, oligo-1,6-α-glukosidaz ve CLP etiketi bulunan oligo-1,6-α-glukosidaz üzerindeki etkileri test edildi. Sonuçta, enkapsülinin özel kargo proteini olan Dyp ve ilişkisiz kargo proteini olan oligo-1,6-α-glukosidaz üzerindeki koruyucu etkileri ayrıntılı olarak karakterize edildi