Kestane (Castanea sativa) tohumundan lipaz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

Bu çalışmada, ülkemizde Giresun İli ve çevresinde bol miktarda yetişen kestane (Castanea sativa) tohumlarından lipaz enzimi ilk defa saflaştırıldı ve kinetik özellikleri incelendi. Petrol eteri ile yağı uzaklaştırılmış kestane tohumları 0.06 M sodyum fosfat tamponu (pH=7.0) ile homojenize edildi. Lipaz esteraz aktivitesi gösteren homojenizatın %90'lık (NH4)2SO4 kesiti elde edildi. Dializden sonra bu kesit sırasıyla hidroksiapatit ve DEAE-selüloz kolonlara uygulanarak lipaz enzimi 186.87 kez saflaştırıldı. Saflaştırma işlemlerinde protein miktarı Lowry ve E280/E260 Warburg yöntemlerine göre, lipaz esteraz aktivitesi ise Erlanson yöntemine göre tayin edildi. Saflaştırılan enzimin SDS-PAGE elektroforezi sonucunda molekül ağırlığının 30 kDa olduğu bulundu. Optimum pH ve sıcaklık değerleri, pH ve sıcaklık stabiliteleri, optimum reaksiyon süresinin tayini, uygun enzim ve substrat konsantrasyonu belirlendi. Kestane tohumlarından saflaştırılan lipazın optimum pH'sının 9.0, optimum sıcaklığının 30°C olduğu bulundu. Enzimin çeşitli substratlara karşı ilgisi incelendiğinde, lipazın ilgisinin en çok p-nitrofenil miristada olduğu ve bu substrata karşı Km ve Vmax değerlerinin sırasıyla 1.017 mM ve 163.874 Ünite olduğu saptandı. Anahtar Kelimeler: Kestane (Castanea sativa) Tohumu, Lipaz, Saflaştırma, Karakterizasyon.