Kolanjiyokarsinoma proliferasyonunun otofaji ve hedgehog sinyal yolaklarının inhibisyonu ile azaltılması

Kolanjiokarsinoma (KKA) ikinci en yaygın karaciğer kanseri türü olarak bilinmektedir. KKA hastalarında hayatta kalma oranları olduça düşüktür. KKA patogenezinde PI3K/AKT/mTOR gibi sinyal yolaklarındaki bozuklukların temel mekanizmalardan biri olduğu düşünülmektedir. Hedgehog sinyal yolağının da KKA dahil birçok karsinogenezde bozulduğu daha önceki çalışmalarla gösterilmiştir. Hh sinyal yolağının lizozomal yıkım sürecinde rol alan otofaji sinyal yolağı ile de etkileşim halinde olduğu bilinmektedir. KKA patogenezinde Hh ve otofaji yolaklarındaki etkileşimin rolü bilinmemektedir. Bu yolaklarının KKA'da deregule edildiği de düşünülerek, bu iki sinyal yolağı arasındaki etkileşimin ve bu etkileşimin KKA patogenezindeki rolünün anlaşılması oldukça önemlidir. Bu çalışmada Hh ve otofaji yolakları arasındaki etkileşimi göz önünde bulundurarak EGI-1 ve TFK-1 hücrelerine otofaji ve Hh sinyal yolağı inhibitörlerini içeren bir kombinasyon muamelesi yapılmıştır. Çalışmamızda ilk olarak bir Hh inhibitörü olan GANT61'in ve farklı otofaji inhibitörlerinin antiproliferatif etkileri MTT, Annexin V ve hücre siklusu analizi ile ortaya konulmuştur. GANT61 (15 uM), chloroquine (TFK-1 için 25 uM ve EGI-1 için 50 uM), ve nocodazole (EGI-1 için 0.2 uM ve TFK-1 için 0.4 uM)'ün IC30 konsantrasyonları belirlendikten sonra, kombinasyon denemeleri yapılmıştır. EGI-1 ve TFK-1 hücreleri Hh inhibitörü ve otofaji yolağının farklı basamaklarını inhibe eden inhibitörlerle muamele edildiğinde, her iki kombinasyonda da hücre proliferasyonunun azaldığı gözlemlenmiştir.Hem tek bir inhibitörle hem de kombinasyonla muamele edilmiş hücrelerin otofaji bağlantılı LC3B ve otofajinin nefatif regülatörü olan Akt ifadesi western blot yöntemi ile incelenmiştir.LC3B ifadesi, Hh inhibisyonu ile birlikte otofajide hangi basamağın inhibe edildiğine bağlı olarak kombinasyonun otofajiyi tetiklediği ya da baskıladığını ortaya koymaktadır. Bu veriler CCA'da otofajiyi kontrol eden mekanizmaları ortaya koyarak, tedavisi için umut vadetmektedir.