Küçük hücreli dışı akciğer kanserinde dosetaksel'in WNT sinyal yolu inhibitörü FH535 ile birlikte kullanımının antiproliferatif etkilerinin araştırılması

Çalışmamızda, KHDAK tedavisinde kullanılan DTX ve WNT sinyal yolağı inhibitörü olan FH535'in kombin halde kullanımının adenokarsinomik insan alveolar bazal epitelyum hücresi A549 ve sağlıklı bronşiyal epitel hücresi BEAS-2B hücre hatları üzerindeki etkileri MTT ve gerçek zamanlı hücre analizi ile değerlendirilmiştir. A549 kanser hücresinin aktivitesini azaltırken BEAS-2B sağlıklı akciğer hücresinde minimum zararı gösteren kombin doz belirlenerek KHDAK'de mitotik aktivite analizi, BrdU analizi ve kaspaz 3-7 aktivite analizi yöntemleriyle in vitro koşullarda bu kombin dozun hücresel seviyede meydana getirdiği etkilerin araştırılması amaçlanmıştır. Bu bağlamda sağlıklı akciğer hücresine minimum zararı verirken; KHDAK hücresinde antiproliferatif etkiyi gösteren dozun belirlenmesiyle birlikte mevcut tedavi protokollerine ek yeni tedavi protokollerinin oluşturulması hedeflenmiştir. Elde ettiğimiz sonuçlara göre; 0,005 μM DTX+0,5 μM FH535 kombinasyon dozunun KHDAK hücre hattı olan A549'da anti-mitotik etki göstererek mitotik katastrofa neden olduğu; sağlıklı akciğer hücresi BEAS-2B'ye minimum zararı vererek tek başına DTX kullanımında verilen sitotoksik etkiden daha fazla zarar vermediği tespit edilmiştir. Bu kombinasyon dozunun ayrı ayrı verilen DTX ve FH535 dozlarının verdiği etkiden daha yüksek bir etki göstererek 0,37505 kombinasyon indeksi değeriyle yüksek sinerjik etkide olduğu tespit edilmiştir. Dolayısıyla A549 hücre hattına uygulanan kombin dozun, hücre üzerindeki etkisinin tek başına her iki ajanın kullanılmasından daha etkili olduğu gösterilmiştir. Tüm sonuçlar birlikte değerlendirildiğinde, kombin uygulama sonrası A549 hücre hattında çoğalma hızı anlamlı şekilde azalmıştır. Gerçek zamanlı hücre analizinde hücrenin anti-mitotik aktivitesinin artarak mitotik katastrof yoluyla ölüme gittiği görülmüştür. Mitotik aktivite analizi sonuçları da gerçek zamanlı hücre analizinden elde edilen mitotik katastrof sonucunu destekleyici şekilde sonuçlanarak kontrol grubuna kıyasla mitotik aktivitede 72 saatte azalma görülmüştür. BrdU analizi ile kombin uygulama sonrası hücre siklusunun sentez fazında, hücre proliferasyonunun nasıl etkilendiği incelenmiştir. BrdU aktivitesinin zamana bağlı olarak kontrol grubuna kıyasla 72 saatte %68'lere düştüğü görülmüştür. Bu sonuç, mitotik aktivite analizi sonuçlarına paralel olarak mitoz bölünmenin azalmasıyla prolifere olan hücre sayısının da azaldığının bir göstergesidir. Hücre canlılığında ve mitotik aktivitedeki azalmaya bağlı olarak hücrenin kombin doz uygulaması sonrası apoptotik hücre ölüm yolağını kullanarak ölüme gidip gitmediğini belirlemek amacıyla kaspaz 3,7 aktivitesine bakılmıştır. Kontrol grubuna kıyasla aktivitede anlamlı bir değişiklik olmadığı görülmüştür. Bu sonuç, gerçek zamanlı hücre analizinden elde edilen verilerle uyumlu olarak kombin doz uygulaması yapılan kanser hücresinin apoptotik hücre ölüm yolağını kullanarak ölmediğini, dolayısıyla anti-mitotik etkiyle; mitotik katastrof yolağını kullanarak ölüme gittiği fikrini desteklemektedir. Çalışmamızda, DTX ve FH535 kombinasyonunun KHDAK modeli A549 hücre hattı ve BEAS-2B sağlıklı akciğer hücre hattındaki etkileri ilk kez gösterilmiştir.