Characterization of leishmania RNA virus infected Leishmania major exosomes and evaluation of the impact of cytosolic DNA sensing related pathways in L. major infection

Leishmaniasis, Leishmania parazitinin neden olduğu ihmal edilmiş bir bulaşıcı hastalıktır. Hastalık, etkili tedavi stratejilerinin acil olarak geliştirilmesini gerektiren önemli bir sağlık sorununu temsil eder. Leishmania RNA virüsü (LRV) barındıran Yeni Dünya Leishmania türleri ciddi, metastatik hastalıklara neden olur. Bu tezde, LRV2-1 bulunduran ve bulundurmayan Eski Dünya L. major suşlarını eksozom içeriği ve enfektiviteleri açısından karşılaştırdık. PCR ve kütle spektrometri bazlı analizler, virüs bulaşmış Leishmania eksozomlarının viral RNA genomunun en az % 64'ünü içerdiğini, ancak viral proteinleri içermediğini ortaya koydu. LRV2-1 pozitif ve negatif L. major suşlarının makrofajlarda benzer enfektivitesi olmasına rağmen pozitif suş, farelerde kutanöz leishmaniasis modelinde gecikmiş enfeksiyon sergiledi. Daha sonra Leishmania enfeksiyonunda cGAS-STING DNA algılama yolunun rolünü araştırmayı amaçladık. STING ve TBK-1 nakavt hücre hatlarındaki enfeksiyon oranları, vahşi tip THP-1 hücrelerinden önemli ölçüde daha düşüktü ve bu fark nakavt hücre hatlarının fagositik kapasitelerinin azalmasıyla ilgiliydi. Daha sonra, TBK1 inhibitörü amlexanox'un in vitro ve in vivo enfeksiyon modellerindeki etkisi araştırıldı. İlaç, makrofajlarda parazit fagositozunu azalttı ve parazit enfekte farelerde ayak pedi şişmesini geciktirdi, bu da amlexanox'un kutanöz leishmaniasis tedavisinde aday bir ilaç olabileceğini düşündürdü. Ayrıca ISG15'i THP-1 hücrelerinde LentiCRISPRv2 sistemi kullanarak mutasyona uğrattık ve ISG15'in L. major enfeksiyonunda ve otofajideki rolünü belirlemeye çalıştık. Bulgularımız Leishmania enfeksiyonunun erken evrelerinde ISG15'in parazit için olunlu bir rolü olduğunu ortaya koydu. Ayrıca, otofajinin ISG15 KO hücrelerinde arttığını ve ISG15'in otofajide düzenleyici bir rolü olduğunu ortaya koyduk. Sonuç olarak bulgularımız Leishmania enfeksiyonunda faydalanılacak ve ilaç hedefi olarak kullanılacak yeni alanlar belirlemesi açısından gelecekteki çalışmalara ışık tutmaktadır