Nevşehir patatesinden (Solanum Tuberosum L.)polifenol oksidaz enziminin afinite kromatografisi ile saflaştırılarak kinetik ve elektroforetik özelliklerinin incelenmesi

Bu çalışmada ekonomik öneme sahip olan Nevşehir patatesinden (Solanum Tuberosum L.) PPO enzimi amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz işlemlerini takiben uygulanan afinite kromatografisi yöntemi ile saflaştırılarak karakterize edilmiştir. Kullanılan afinite jeli Sepharose-4B-L-tirozin-p-aminobenzoik asit kimyasal yapısına sahiptir. Nevşehir patatesinden PPO enzimi % 15.16 verim ve 52.25 saflaştırma derecesi ile elde edilmiştir. Farklı substratlar için optimum pH ve sıcaklık taraması yapılmıştır. Saflaştırılan enzim L-tirozin ve p-kresol substratlarına karşı hiçbir aktivite göstermezken, katekol, gallik asit ve pirogallol substratlarına karşı oldukça yüksek bir akivite göstermiştir. Bu sonuçlar Nevşehir patatesi PPO enzminin monofenolaz (kresolaz) aktivitesinde yoksun olduğunu ve sadece difenolaz (katekolaz) aktivitesine sahip olduğunu göstermektedir. Optimum pH ve sıcaklık çalışmalarında en yüksek aktiviteyi pH 7 ve 20 0C ' de katekol substratı ile elde edilmiştir. Katekol substratı için KM ve Vmaxdeğerleri sırasıyla, 5 mM ve 5000 U/mLdak olarak bulunmuştur. Altı farklı inhibitör için IC50 ve Ki değerleri tespit edilmiştir. Askorbik asitin enzim üzerinde en güçlü inhibitör etkisi gösterdiği gözlenmiştir.