Contribution of notch signaling on hcc stem cell status and utilizing TLR agonists and notch inhibition to improve HCC therapy

Hepatosellüler karsinom (HSK) dünya genelinde en sık görülen kanserler sıralamasında yedinci, kanser kaynaklı ölümler göz önünde bulundurulduğunda ise üçüncü sırada yer almaktadır. Birçok solid tümörde görüldüğü gibi, HSK tümörlerinde de bir kanser kök hücresi altpopulasyonu barındırdığı bilinmektedir. Bu nedenle, HSK tümörlerinin radyoterapi ve kemoterapiye direnç geliştirmeleri bu kanser kök hücrelerinin düzeyleriyle sağlanmakta olduğu düşünülmektedir. Günümüzde HSK tedavisi için en etkin yol karaciğer naklidir. Ne yazık ki, uygun donör azlığı bu yaklaşımın etkin sağaltım sağlamasını sınırlı kılmaktadır. Bu bağlamda, karaciğer kanseri kök hücre altgruplarıın düzeyini belirleyip miktarını azaltacak stratejiler geliştirmek, etkili tedavi yöntemleri geliştirilmesine önemli katkılarda bulunacaktır. Bu çalışmada, HSK kökenli 17 hücre hattı kullanılarak bir kanser kök hücresi paneli oluşturulmuştur. İmmünoperoksidaz ve Akım Sitometresi tenikleriyle gerçekleştirilen tarama sonunda altı KKH'nın kabul edilen bir kanser kök hücresi (KKH) markörü olan CD133 ifadesi bakımından oldukça pozitif olduğu saptanmıştır. Daha sonra üç hücre hattı HepG2, Huh7 ve Hep3B-TR (TGF-beta-1 almaçı duyarsızlaştırılmış) seçilerek Notch yolağının etkinleştirilmesi veya bastırılması, kök hücre altgrubu düzeyine olan etkisi belirlenmiştir.. Elimizdeki veriler, Huh7 ve HepG2 hücre hatlarının DAPT (bir tür gamma-sekretaz inhibitörü) ile muamelesi sonucunda CD133+/EpCAM+ KKH altpopulasyonun yarı yarıya azaldığını, buna karşın Hep3B-TR hücrelerinde herhangi bir değişim saptanmadığı gözlenmiştir. Bu veriler, TGFβ1 reseptörünün KKH oluşumunda ve devamlılığında rolü olabileceği ihtimalini önermektedir. Seçilen hücre hatlarının Jagged-1 (Notch ligandı) ile muamelesi sonucunda ise KKH altpopulasyonu üzerine bir etki oluşturmamıştır. Bu hücre hatlarının bazal toll-benzeri reseptör (TLR) ifade düzeyleri PZR metoduyla incelendiğinde, TLR5 ve TLR7 transkriptlerinin yüksek olduğu bulunmuştur. Bu ulaklarla hücreleri muamele edilince de, TLR3, 7/8 ve 9 genlerinin daha fazla arttırdığı gözlenmiştir. Bu sonuçların ışığında Notch inhibitörüyle, TLR ulaklarının kullanıldığı bir kombine tedavinin HSK tümörü geliştirilmiş atimik farede denenmesi planlanmıştır. Çalışmanın son bölümünde, Huh7 hücreleri farelere zenograft edilerek, ya sadece TLR ligand kokteyli, veya DAPT eklenmiş şekilde, iki kez peritümöral enjeksiyonu sonunda (bir hafta arayla) tümör düzeyleri takip edilmiştir. Sonuç olarak, TLR3, TLR7/8 ve TLR9 ligandlarının DAPT ile kombine terapisinin uygulandığı hayvanlardaki tümör boyutlarının önemli derecede gerilediği bulunmuştur.