Glutatyon s-transferaz (GST) enziminin sıçan eritrositlerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkisinin araştırılması

Bu çalışmada glutatyon S-transferaz (GST; EC: 2.5.1.18) enzimi, sıçan eritrositlerinden glutatyon agaroz afinite kromatografisi ile tek basamakta 6.3 EU / mg protein spesifik aktivite ile % 44 verimle 115 kat saflaştırıldı. Enzimin saflığı, sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile tespit edildi.Saf enzimin alt birimlerine ait molekül ağırlığı 25.2 kDa olarak hesaplandı. Sıçan eritrositlerinden saflaştırılan GST enzimi için yapılan karakterizasyon çalışmalarında; optimum pH potasyum fosfat tamponu pH=8, optimum iyonik şiddet potasyum fosfat tamponu 0.2M, optimum sıcaklık 50oC, stabil pH potasyum fosfat tamponu pH=8 olarak belirlendi. Yapılan kinetik çalışmalarsonucunda; GST enzimine ait iki substrat olan glutatyon (GSH) ve 1-kloro- 2,4-dinitrobenzen (CDNB) için KM ve Vmax değeri sırasıyla GSH için 1.22 mM ve 1.21 EU / mL, CDNB için 0.374 mM ve 3.614 EU / mL olarak bulunmuştur. Son olarak, bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine olan etkileri in vitro olarak çalışıldı. Yapılan çalışmalar sonucunda buscopan ve ampisidin antibiyotiklerinin rat eritrositlerinden saflaştırılan GST enziminin aktivitesini artırdığı, gentamisin ve klindamisin' antibyotiklerinin, enzim aktivitisini inhibe ettiği (IC50 değerleri sırasıyla 1.69 ve 6.9 mM olarak, Ki değerleri sırasıyla 1.70 ve 2.36 mM bulundu), sefazolin antibiyotiğinin ise enzim aktivitesi üzerinde bir etkisinin olmadığı tespit edildi.