Rhizoctonia solani AG4 ZB-34 α-amilazının katı faz fermentasyon tekniğiyle üretimi, saflaştırılması, immobilizasyonu ve çeşitli endüstriyel alanlardaki kullanılabilirliğinin incelenmesi

Bu çalışmada, Rhizoctonia solani AG4 ZB-34 fungusundan tarımsal bir atık olan mısır kepeği kullanılarak katı faz fermentasyon (SSF) tekniği ile ucuz bir şekilde ve bol miktarda α-amilaz üretildi. En iyi enzim üretimi için katı faz fermentasyon şartları başlangıç pH'sı 7,00, nem seviyesi %100, 28 °C'de 6 gün inkübasyon ve %1'lik nişasta ilavesi olarak belirlendi. Nişasta afinite tekniğiyle yapılan saflaştırma işlemi, 11,17 kat ve %5,32'lik verimle tek basamakta gerçekleşti. Serbest enzim kitosana %67,9, kalsiyum alginata %59,6 verimle immobilize edildi. Serbest ve immobilize enzimlerin en yüksek aktiviteyi nişasta varlığında gösterdiği tespit edildi. Serbest enzim, kitosana immobilize enzim ve kalsiyum alginata immobilize enzim için optimum değerler sırasıyla pH 5,50 ile 50 °C; pH 4,50 ile 40 °C ve pH 5,50 ile 60 °C olarak belirlendi. Enzimlerin Michaelis-Menten kinetiğini takip etmediği ve sigmoidal substrat doygunluk eğrilerine sahip oldukları tespit edildi. Isıl ve pH kararlılık çalışmalarında immobilize enzimlerin serbest enzime göre daha kararlı oldukları tespit edildi. İnce tabaka kromatografisi ile serbest enzimin 1 dakika reaksiyon sonunda açığa çıkardığı hidroliz ürünleri glukoz ve maltoz olarak belirlendi. Yıkama performansı analizi çalışmasında serbest ve kitosana immobilize α-amilazların deterjanlarla beraber kullanıldıklarında reçel ve çikolata lekesi içeren kumaş parçalarını daha iyi temizledikleri tespit edildi. Serbest enzimin haşıl alma etkinliğinin kitosana immobilize enzime göre daha iyi olduğu görüldü. Kalsiyum alginata immobilizasyon sonucunda enzimin hem elma hem de portakal suyunu serbest enzime oranla daha fazla berraklaştırdığı tespit edildi.