Molecular identification of wild non-saccharomyces yeasts from wine BY PCR-RFLP and strain differentiation by rapd

Saccharomyces-dışı (Non-Saccharomyces) (NS) mayalar, üzüm şırasında alkol fermantasyonunun ilk aşamalarında baskındır, ve son aşamada şarapta uygun organoleptik özelliklerin oluşumunda rol oynar. NS mayaların, Saccharomyces cerevisiae ile birlikte sıralı aşılamada başlangıç kültürü olarak kullanılması için tanımlanması, arzu edilen özelliklere sahip şarap üretmek için etkili bir yaklaşımdır. Bu çalışmada, Türkiye'deki beş farklı üzüm türünün geleneksel şaraplarından farklı maserasyon ve fermantasyon sürelerinde izole edilen 18 Saccharomyces dışı maya, PCR-RFLP (Polymerase Chain reaction- Restriction Fragment Lenghth Polymorphism) yöntemi ile cins ve tür seviyesinde tanımlanmış ve daha sonra Lachancea thermotolerans (Lt), Metschnikowia pulcherrima (Mp), Hanseniaspora uvarum (Hu), Hanseniaspora opuntiae (Ho) türleri seçilerek, bu türlere ait suşların RAPD–PCR tekniği ile genotipik farklılıklar belirlenmiştir. PCR ile rDNA'nın internal transcribed spacer (ITS) bölgesinin (ITS1-5.8S-ITS2) amplifikasyonu maya izolatlarının bazılarında cins seviyesinde tanımlamaya izin vermiştir. Ancak, cins ve/veya tür seviyesinde kesin tanı, ITS bölgesinin uygun restriksiyon enzimler ile kesildigi PCR-RFLP yöntemi ile mümkün olmuştur. Bu çalısmada, beş farklı endonükleaz enziminin, HhaІ (CfoI), HaeIII, HinfI, DdeI and DraІ kullanıldığı ITS bölgesi restriksiyon kesimi NS mayaların tanımlanmasını sağlamıştır. Diger yandan, RAPD primeri OPA-03, minisatellite primer M13 ve, microsatellite primerleri (ATG)5, (GTG)5 aynı türe ait olan suşların (Lt, Hu, Ho, Mp türlerine ait suşlar) farklılaştırılmasında fayda sağlamıştır.