Siraz (Capoeta umbla) karaciğerinden karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı metal ve pestisitlerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması

Bu tez kapsamında, Siraz ( Capoetaumbla) karaciğer dokusunda Karbonik anhidraz (CA, karbonat hidroliyaz, E.C. 4.2.1.1) enzimi üzerine bazı metallerin ve pestisitlerin in vitro etkileri incelendi. Siraz (C.umbla) balığınınkarbonik anhidraz enzimi karaciğer dokusundan ilk kez tarafımızdan afinitekromatografisi (Sepharose 4B–L–tirozin–sulfanilamid) yöntemi ile saflaştırıldı. Afinitekromatografisi neticesinde enzim 2026,32 EÜ/mg spesifik aktiviteyle ve % 59,97 verimle 212,40 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin saflığını kontrol etmek amacıyla Sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel (SDS-PAGE) elektroforezi yapıldı ve tek bant elde edildi. Siraz ( C.umbla) karaciğer dokusu CA enzim için yapılan kinetik çalışmalarda; p-nitrofenil asetat substratı kullanılarak Km ve VmaxLineweaver-Burk grafiklerinden hesaplandı.K-fosfat tamponunda optimum pH 7.0, Tris-SO4 tamponunda optimum pH 8.5, optimum iyonik şiddet 0,080 M K-fosfat, optimum sıcaklık 35ºC olarak, stabil pH ise K-fosfat tamponunda pH 8.5 olarak bulundu. Saflaştırılan CA enzimi üzerine bazı metal iyonları ile bazı pestisitlerin etkileri incelendi ve inhibisyon gösteren Cu+2, Mn+3, Ba+2, Se-2 metal iyonları ile aldrın, dıeldrın, endosülfan, hexachlorbenzene, alpha- HCH pestisitleri için IC50 değerleri ve Ki sabitleri hesaplandı .