Characterization of sorting nexin 3 (SNX3) function

Sorting Nexin 3 (SNX3) sorting nexin familyasına ait olan, endositik trafik ağında yer alan bir proteindir. SNX3 sadece PX domainine sahiptir ve bu domain sayesinde endozomlardaki fosfatidil inositol-3-fosfata bağlanır ve retromer kompleksinin erken endozomlarda oluşumunu sağlar. Endositozla hücre içine alınan reseptörler, hücre zarına geri dönebilirler; Trans-Golgi Ağı'na yönlendirilebilirler veya lizozomlarda yıkıma uğrayabilirler. Daha önceki çalışmalarımızda, SNX3'ün mesajcı RNA (mRNA)'sının meme kanserlerinde alternatif poliadenilasyona uğrayarak arttığını göstermiştik. Bu sebeple, düzensiz SNX3 ifadesinin, kanser hücrelerinde hücre zarı reseptörlerinin endositik trafiğinin dinamiklerini değiştirebileceğini hipotez ettik. Hipotezimizi test etmek için, kanser hücre hatlarında SNX3'ün farklı RNA interferaz (RNAi) modelleri geliştirdik. Bu modellerde, WLS (Wntless, SNX3'ün bilinen kargolarından biri) ve EGFR (Epidermal Büyüme Hormonu, SNX3'ün muhtemel kargosu) seviyeleri SNX3'ü baskılanmış hücrelerde, kontrole kıyasla, değişmiştir. Proksimiti ligasyon tekniği kullanılarak, SNX3 ve EGFR arasındaki olası etkileşimi gösterdik. Immunoboyama ile SNX3'ün ve düzensiz ubikutinlenen ve anormal hücre içi lokalizasyon gösteren mutant formlarının hücre içi lokalizasyonlarını belirledik. Özetle, SNX3'ün EGFR protein seviyesini modüle ettiğini ve ubikutinlenmenin SNX3'ün fonksiyonunda önemli olabileceğini gösterdik. SNX3'ün görevinin ve endositik trafiğin anlaşılması, EGFR'ye karşı geliştirilecek olan hedefli terapilerde etkili olabilir.