Differentiation of hepatocyte like cells from immortalized mouse embryonic fibroblasts harboring large t antigen

Edinilmiş ve genetik kaynaklı karaciğer hastalıkları genellikle ilerleyici ve hayati tehlike arz eden özelliktedir. Organ transplantasyonunun en iyi sonuç veren tedavi olarak kabul edilmesine rağmen, hasta sayısı nakile uygun donör sayısını aşmaktadır. Somatik hücrelerin doğrudan indüklenerek hepatosit benzeri hücre elde edilmesi yeni umut vaat eden yöntemlerden biridir ve önceden tanımlanmıştır. Ancak hepatosit benzeri hücrelerin, SV40 büyük T-antijeni ile immortalize edilmiş Fare Embriyonik Fibroblastlardan (FEF) elde edilmesi henüz çalışılmamıştır. Bu amaçla, karaciğerin embriyonik farklılaşmasında rol oynayan Hnf4α, Foxa2 ve Foxa3 transkripsiyon faktörlerinin retroviral vektörlerle ayrı ve farklı kombinasyonlarla ölümsüz FEF hücrelerine verilmesinin etkilerini inceledik. Bir transkripsiyon faktörüyle enfekte edilen FEF hücreleri epitel ve hepatosit hücre karakterlerini moleküler olarak önemli miktarda göstermediler. Ancak, Hnf4 α +Foxa2 ya da Hnf4 α +Foxa3 kombinasyonu ölümsüz FEF hücrelerinde epitelyal E-cadherin ifadesi; albumin ifadesi ve glikojen depolanması gibi hepatosit karakterlerinin ifadesini uyardığı gözlendi. Bu süreci etkileyen epigenetik mekanizmaların aydınlatılması için, histon varyantlarından koşullu olarak gen ablasyonu yapılabilen transgenik farelerin genotiplemesi yapıldı. Ayrıca, histon varyantı H3.3A geninde koşullu olarak gen ablasyonu yapılabilen ölümsüz FEF hücreleri, Cre rekombinaz genini ifade eden retroviral vektörlerle enfekte edilmiştir. Bu çalışmada Büyük T-antijeni ile immortalize edilmiş FEF hücrelerinin, primer FEF hücreleri için dizayn edilmiş protokolü kullanarak, hepatosit benzeri hücrenin doğrudan elde edilebildiği kanıtlanmıştır. Ayrıca, genetik olarak belirlenmiş hayvanlardan FEF hücreleri izolasyonu ve immortalizasyonu yaparak, histon varyantlarının hepatosit transdiferensiyasonundaki rolünü anlamak için önemli bir araç elde edilmiştir.