Termofilik Geobacillus sp. TF17 suşundan esteraz saflaştırılması ve karakterizasyonu

Gerçekleştirilen bu çalışmada, termofilik bir bakteri olan Geobacillus sp. TF17 suşundan esteraz enzimi iyon değişim kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. Saf enzim eluatında esteraz varlığı doğal PAGE ile tek bir bant halinde ortaya konuldu. pNPB substratı varlığında, enzimin optimum pH'sı 7,5, optimum sıcaklığı ise, 50 °C olarak belirlendi. Saf enzimin, 4 °C'de pH 4,0-9,0 aralığında 72 saatlik inkübasyon süresi sonunda optimum pH değerindeki aktivitesini tamamen koruduğu gözlendi. Saf enzimin 30-80 °C arasındaki sıcaklıklarda yapılan kararlılık denemelerinde enzimin 70 ve 80 °C'de 4. saat sonunda aktivitesini tamamen kaybettiği, buna karşılık 30, 40 ve optimum sıcaklığı olan 50 °C'de aktivitesini 3. günün sonunda %100 oranında koruduğu tespit edildi. Yapılan kinetik çalışmalar sonucunda, pNPB substratı varlığında hesaplanan Km ve Vmaks değerleri sırasıyla 0,056 mM ve 19,38 U/mg protein olarak belirlendi. Bazı genel organik çözücüler varlığında enzim aktivitesinin davranışları ortaya konulmuş olup, denenen organik çözücülerden izopropanol ve asetonitrilin enzim aktivitesinin %60'dan fazlasını inhibe ettiği görüldü. Ayrıca bazı metal iyonlarının enzim aktivitesini farklı oranlarda etkilediği tespit edildi. Sonuç olarak, Geobacillus sp. TF17 esterazının oldukça pH ve ısıl kararlı olduğu gözlemlenmiş ve ayrıca Km değeri açısından literatürde bilinen esterazlardan bazı üstün özelliklere sahip olduğu, Vmaks değerinin ise literatürle uyumlu olduğu ortaya konmuştur. Elde edilen veriler dikkate alındığında enzimin endüstriyel uygulamalarda kullanılabilecek bir potansiyele sahip olduğu görülmektedir.