Zebrabalığında OR103-1/5 genleri arasındaki dizinin iki sistronlu protein çevrimini sağlayan bir araç olarak doğrulanması

Koku alma sisteminde mevcut olan her bir sinir hücresi geniş ve çeşitli bir yelpazeden yalnızca bir tane koku almaç genini ifade eder. Ancak zebrabalığı koku alma sisteminde bu kurala istisna teşkil eden bir vaka OR103-1 ve OR103-5 genlerinin eşzamanlı ifade edilmesinin tespitiyle ortaya çıkarılmıştır. İki gen arasındaki eşzamanlı ifadenin dizgeli tabiatından dolayı bu düzenin iki gen arasındaki dizilimden kaynaklandığı varsayımını oluşturduk. Tek bir diziden çift gen ifade edilmesine imkan tanıyan vektörler vasıtasıyla varsayımımız öncelikli olarak hücre kültüründe sınandı. HeLa hücrelerinde gerçekleştirilen deneylerin sonuçları OR103-1/5 genleri arasındaki dizinin IRES (dahili ribozom giriş mevki) işlevine sahip olduğunu gösterdi. Ardından, iki muhbir protein arasına klonlamak suretiyle OR103-1/5 genleri arasındaki dizinin zebrabalığı embriyolarında OR103-1 ve OR103-5 gen bölgesinin davranışını tekrar edebilme yeteneği sınandı. Koku alma sistemi içerisinde ve dışarısında mevcut sinir hücresi kümelerinde, muhbir proteinler arasında görülen yüksek eşzamanlı etiketlenme oranları OR103-1/5 genleri arasındaki bölgenin aynı dizi üzerindeki iki adet proteini birlikte ifade ettirme kabiliyetini doğruladı. Muhbir proteinlerin farklı DNA parçalarına bölünmeleri veya RNA dökümünün polyA (çoklu adenilleme) dizisi ile zoraki sonlandırılması muhbir proteinler arasında görülen eşzamanlı etiketlenme oranlarını önemli ölçüde tahrip etti. Öte yandan, aynı deney düzeneğinde OR103-1/5 genleri arasındaki dizinin bir başka promotör bölgesi ile takası, benzer düzeyde eşzamanlı etiketlenme oranları temin edemedi. Ardından vektörlere koku almaç proteini kodlayan diziler eklendiğinde zebrabalığı beyninde muhbir proteinlerce görselleştirilen nöronların bir kısımının oluşturduğu yeni küresel yapılar meydana geldi. Nihai olarak, transgenik koku almaç proteinlerinin koku alma sinirlerindeki mevcudiyeti, Myc-etiketine karşı yapılan boyama deneyleriyle ispat edildi. Böylelikle, transgenik koku almaç proteinlerinin belirli bir koku alma siniri kümesine takdimi OR103-1/5 genleri arasındaki dizinin kullanılması ile gerçekleştirildi.