Van ilinden alınan sıcak su örneklerinden termofilik bakterilerin izolasyonu, identifikasyonu, Bacillus licheniformis EA10'dan proteaz enziminin üçlü faz ayırma sistemi (TPP) ile saflaştırılması ve karakterizasyonu

Bu tez çalışması kapsamında; Van Çaybağı ve Hasanabdal Kaplıcalarından temin edilen sıcak su örneklerinden toplam 10 adet termofilik bakteri izole edildi. İzolasyon sonrasında yapılan konvensiyonel ve moleküler analizler sonucunda 10 izolat (EA1, EA2, EA4, EA5, EA6, EA7: Bacillus thermolactis; EA3, EA9, EA10: Bacillus licheniformis; EA8: Anoxybacillus pushchioensis) tür düzeyinde tanılandı. Petri denemeleri sonucunda 3 suşun proteaz enzim aktivitesi bakımından pozitif olduğu gözlemlendi, en yüksek aktiviteyi ise EA10 izolatının verdiği tespit edildi. B. licheniformis EA10'dan proteaz enziminin saflaştırılması TPP yöntemiyle ilk kez bu çalışmada uygulandı. Bunun için tuz, organik çözgen ve pH optimizasyonu yapıldı ve pH 6,0'da, 1,0:0,5 (ham enzim çözeltisi:t-bütanol oranı) ve %70 doygun amonyum sülfat kullanılarak uygulanan TPP sistemi sonucunda %191,6 verimle 54,1 kat saflaştırılan enzimin molekül ağırlığı SDS-PAGE jel elektroforez yöntemiyle yaklaşık 37,67 kDa olarak hesaplandı. Protez enzimi için optimum pH 9,5 ve optimum sıcaklık 80°C olarak belirlendi. Enzimin 90°C gibi yüksek bir sıcaklıkta 120 dk inkübasyonun sonunda aktivitesinin hiç düşmediği ve inkübasyon süresinin aktiviteyi arttırıcı etki gösterdiği tespit edildi. B. licheniformis EA10'dan proteaz enziminin okside edici ajan olan H2O2 varlığında kararlılığını %1 ve %5'lik konsatrasyonlarda sırasıyla %107 ve %102 oranında koruduğu tespit edildi. Organik çözücülere karşı yüksek bir stabilite gösteren enzimin Mn2+ metalinin 1mM konsantrasyonunda aktivitesini koruduğu görüldü, 5 ve 10 mM'lık konsantrasyonlarında ise sırasıyla %164 ve %237 oranında enzimin aktivitesini artırdığı belirlendi. EDTA varlığında enzim stabilitesinin %104,6 oranında korunduğu belirlendi. B.licheniformis EA10'dan alkali proteaz enziminin hem kazeine hem de gelatine yüksek substrat spesifitesi olduğu görüldü, kazein substratı için KM ve Vmax değerleri sırasıyla 0,376 mg/ml ve 14,085 µmol.ml-1.dk-1 olarak hesaplandı.