Yeni bir termofilik bakterinin, Anoxybacillus gonensis A4, hücredışı lipaz/esteraz yeteneğinin incelenmesi ve karakterizasyonu

ÖZET Bu çalışmada yeni bir termofilik bakteri olan Anoxybacillns gonensis A4 (A. gonensis A4) susunun esterolitik aktivitesi incelendi. Ester bağlarını hidrolizleyen hücre dışı bir enzimin varlığı tributirin-agar testi ile belirlendi. Tributirinli petrilerde büyütülen A. gonensis A4 izolatı etrafında berrak bölgelerin oluşması bu termofilde bir esterazm varlığını desteklemektedir. %0,3 karboksimetilselüloz Luria-Bertani (LB) besiyerinde büyümeyi ve spektrofotometrik olarak belirlenen esteraz aktivitesini artırdı. Substrat özgünlük çalışmaları, A. gonensis A4 susundan hazırlanan hücredışı enzim özütünün, kısa zincirli /?-nitrofenil (PNP) esterlerini hidrolizleme kabiliyetinin uzun zincirli p-nitrofenil (PNP) esterlerini hidrolizleme kapasitesine göre daha yüksek olduğu saptandı. A. gonensis A4 susu hücredışı esterazının optimum sıcaklığı yaklaşık 80 °C, optimum pH'ı ise 5,5 olarak belirlendi. Isıl kararlılık eğrisi incelendiğinde, enzimin 30 dakika 30-70 °C arasındaki sıcaklıklarda inkübasyonuyla aktivitesinin yaklaşık %20 oranında arttığı gözlendi. Metal iyonlarının A. gonensis A4 susu hücredışı esteraz enzimi aktivitesi üzerine etkisini incelemek amacıyla nihai konsantrasyonu 1 mM olacak şekilde 11 farklı metal klorür tuzu kullanıldı. Enzim aktivitesi K+ varlığında %15 artış gösterdi ve diğer metal iyonlarının bazıları aktivite üzerinde hiçbir etki göstermezken diğer bazılarının aktiviteyi düşürdüğü gözlendi. Fenilmetilsülfonilflorür tarafından inhibisyon katalitik aktivitede önemli bir rol oynayan kritik bir serin amimoasidinin varlığını desteklemektedir. Elde edilen sonuçlar, A. gonensis AA susunun, genel olarak önceden belirtilen esterazlara benzer özelliklere sahip yüksek derecede ısıl kararlı bir gerçek esteraz salgıladığını göstermektedir. Anahtar Kelimeler: Termofilik, Isıl Kararlı, Anoxybacillus, Lipaz, Esteraz V