3
Arşivlenen Tez
0
DOI Atanmış
0%
DOI Oranı
Anabilim Dalı
Fruktoz, trehaloz ve sükroz içeren tris bazlı sulandırıcıya kolesterol yüklü siklodekstrin (CLC) ilavesinin koç spermasının dondurulabilirlik ve çözüm sonu spermatolojik parametreler üzerine etkilerinin araştırılması
Bu çalÕúmanÕn amacÕ koç spermasÕQÕn dondurulmasÕ sÕrasÕnda ortaya çÕ kan ve tohumlamalardan sonra gebelik oranlar ÕQÕn önemli ölçüde düúmesine yol açan spermatozoon membran hasarlarÕQÕn minimize edilmesi amacÕyla Fruktoz, Trehaloz ve Sükroz içeren sulandÕUÕFÕya kolesterol ilavesinin dondurma sÕrasÕndaki koruyucu etkisi ve çözüm sonu spermatolojik parametreler üzerine etkinli÷inin araúWÕUÕlmasÕGÕr. ÇalÕú mada toplam 5 baúKÕYÕrcÕk Õ rkÕ koç ve bu koçlardan elektro-ejakulatör kullanÕlarak toplanan ejakülatlar kullanÕldÕ. AlÕnan sperma örnekleri motilite ve anormal spermatozoon oranlarÕ yönünden muayene edildi. Toplanan ejekülat spermatozoon yo÷unluklarÕ hemositometrik yöntemle belirlendi, ejekülatlar biri CLC içermeyen grup di÷eri de CLC (120x10 6 spermatozoon /3mg) içeren grup olmak üzere 2 eúit kÕ sma ayrÕldÕ. 35 o C de 15 dk ønkübasyondan sonra CLC içeren ve CLC içermeyen gruplarÕ her ikisi de 3 alt gruba ayrÕldÕ . Bu alt gruplar fruktoz, sükroz ve trehaloz solüsyonlar Õyla sulandÕUÕldÕ ve payetlere çekildi. Payetler equlibrasyon iúlemi için beklemeye bÕ rak ÕldÕ . Equlibrasyon iúleminden sonra payetler sÕYÕ azot buharÕnda dondurularak sÕYÕ azotun içinde saklandÕ . Çözülen payetlerden spermatozoa motilitesi, ölü-canlÕ ve anormal spermatozoon oranlarÕ , spermatozoon membran bütünlü÷ünü ve prematüre akrozom reaksiyonuna giren spermatozoon oranlarÕQÕn belirlenmesi amacÕyla örnekler alÕndÕ . YapÕlan çözüm sonu muayeneler sonucunda motilite açÕVÕndan úeker gruplarÕ arasÕnda istatiksel bir farklÕOÕk görülmezken en iyi sonuçlar CLC içeren CLC-trehaloz (%54.5±3.28) ve CLC-fruktoz (%54±2.86) gruplarÕnda elde edildi. CanlÕ spermatozoon oranlarÕnda ise CLC içeren fruktoz ve sükroz grubunun CLC içermeyen fruktoz ve sukroz grubuyla arasÕnda istatiksel bir farklÕOÕk gözlendi (P<0.05). Anormal spermatozoon oranlarÕnda ise gruplar arasÕ fark bulunmadÕ . Sa÷lam plazma membranÕna sahip spermatozoon oranÕ ve canlÕ -sa÷lam plazma membranÕna sahip spermatozoon oranlarÕ açÕVÕndan CLC-trehaloz grubunda bulundu. Prematüre akrozom reaksiyonuna giren spermatozoon oranlarÕCLC içeren úeker gruplarÕnda CLC içermeyen gruplara göre önemli derecede düúük bulundu. CLC içeren ve CLC içermeyen gruplar arasÕndaki fark istatiksel olarak önemli bulundu (P<0.05). Sonuç olarak, kullanÕlan úekerlerin bazÕ parametreler üzerine etkisi önemli olmakla beraber CLC'nin koruyucu etkisinin çok daha belirgin oldu÷u saptandÕ. Anahtar Kelimeler: CLC, dondurma, fruktoz, koç spermatozoon, sükroz, trehaloz
Sıcak stresinin koçlarda in-vitro spermatolojik parametreler üzerine etkisi
Çevresel veya suni olarak uyarılmış sıcak stresinin üreme üzerine etkileri insan, fare, tavşan, boğa ve koç gibi farklı türlerde çalışılmıştır. Fakat sıcak stresinin koç spermatozoonları üzerine etkileriyle ilgili çalışmaların sayısı yetersizdir. Aynı zamanda bu çalışmalarda sıcak stresinin koçlarda bazı temel spermatolojik parametreler üzerine etkisi incelenmiştir. Bu çalışma, çevresel sıcak stresinin koç spermatozoonları üzerine etkisini geniş bir perspektif içerisinde ortaya koymak amacıyla tasarlanmıştır. Spermalar (n=72) altı baş olgun koçtan elektro-ejakülator yardımı ile aylık olarak yıl boyunca alınmıştır. Yılın en sıcak altı ayına (Mayıs-Ekim) ait spermalar (n=36) sıcak stresi dönemi, yılın diğer altı ayına (Kasım-Nisan) ait spermalar (n=36) ise kontrol dönemi olarak kabul edilmiştir. Bu gruplandırma ile aşım sezonu da her iki döneme eşit biçimde paylaştırılmıştır. Sıcak stresi ve kontrol dönemine ait sperma örnekleri hacim, yoğunluk, motilite, ölü-canlı spermatozoon oranı, anormal spermatozoon oranı, spermatozoon plazma membran ve DNA bütünlüğü, akrozom reaksiyonu geçirmiş spermatozoon oranları gibi spermatolojik parametreler yönünden karşılaştırılmıştır. Sıcak stresi spermatozoon yoğunluğunu, motilitesini ve spermatozoon plazma membran bütünlüğünü düşürmüştür (P<0,05). Aynı zamanda, ölü ve anormal spermatozoon oranlarını arttırmıştır (P<0,05). Sonuç olarak, çevresel sıcak stresi koçlarda yoğunluk, motilite, spermatozoon plazma membran bütünlüğü, canlı ve morfolojik olarak normal spermatozoon oranları gibi bazı spermatolojik parametreleri olumsuz şekilde etkilemiştir. Anahtar Kelimeler: Koç, sıcak stresi, spermatozoon, membran bütünlüğü, DNA bütünlüğü.
Seasonal dynamics in acrosome reaction induction in ram spermatozoa
Two longitudinal studies were conducted to evaluate the seasonal dynamics in acrosome reaction induction and osmotic tolerance limit of ram sperm. Semen was collected using an electroejaculator once a month from 6 mature rams (three ejaculates per each ram per season) throughout study period during winter (Dec-Feb), spring (Mar-May), summer (Jun-Aug) and autumn (Sep-Nov). In study 1 acrosome reaction was induced in vitro by using different inducing agents; LPC and CI. The samples were then incubated in water bath at 37°C for 3 hrs. At various intervals (15, 30, 60, 120 and 180 min) after stimulation with LPC or CI, the acrosomal status of the samples was monitored by using fluorescent staining (FITC-PNA). The AR induced in the presence of LPC or CI showed different pattern in different seasons. The percentage of acrosome reacted sperm was higher (P<0.05) in LPC and control during winter season compared to other seasons at all incubation time intervals (15-180 min). However, CI induced the AR in a time dependant manner (reacted sperm rate gradually increased over incubation time of 180 min) and it varied dramatically between seasons. During winter and summer seasons, the CI-induced AR remained higher (P<0.05) at all incubation time points. In study 2 the sperm samples were exposed to fructose-sodium citrate solutions of different osmolalities (50,100, 290, 500 and 1000 mOsm/L). The samples were then incubated at 35°C for 15 min. The isosmotic and hyperosmotic incubation samples (290, 500, 750 and 1000 mOsm/L) were returned to hypo-osmotic condition. After osmotic challenges, the sperm viability and membrane integrity were estimated using a combined hypo-osmotic swelling and eosin test (HE test). The live sperm percentage was recorded lowest (P<0.05) at all hypo, iso and hyperosmotic conditions during winter season. Similarly lowest (P<0.05) intact and live-intact sperm percentages were observed in 50, 100, 290, 500 and 100 mOsm/L conditions during winter season. The highest membrane integrity rate in terms of live, intact and live-intact sperm proportions after exposure to anisoomotic media were recorded in autumn season whereas, these parameters were lowest during winter season under the same osmotic conditions in this studyBest membrane integrity was recorded during autumn season. In conclusion both LPC and CI are use different pathways for AR induction and responsible to provoke signaling transduction pathway. It can be hypothesized that the extra receptivity of ram sperm to undergo AR in fresh, LPC or CI treated groups during winter season as observed in the present study, might be due to an expected increase in melatonin during this season. Moreover, season has significant influence on osmotic tolerance limit of ram sperm. The best osmotic tolerance during autumn might be the reason of better fertility in breeding season in ram.