Trastuzumab tayini için kromatografik ve elektrokimyasal yöntem geliştirilmesi

Günümüzde monoklonal antikorların çok çeşitli hastalıkların tedavisinde kullanılması, onları biyofarmasötik pazarında öncü bir ürün haline getirmiştir. Bu tez kapsamında IgG yapısında bir monoklonal antikor olan, insan epidermal büyüme faktörüne etki eden ve meme kanseri tedavisinde kullanılan Trastuzumab'ın biyoeşdeğerlik çalışmaları için analitik yöntemler incelenmiştir. Bu amaçla üç farklı yöntemden yararlanılmıştır. İlk çalışmalar, serum örneklerinde HPLC-FLD sistemi kullanılarak Trastuzumab analizini içermektedir. Toplam Trastuzumab tayini için Protein G kolan kullanılarak serumdan saflaştırma yapılmış ve HPLC-FLD sistemi ile analizlenmiştir. İkinci bölümde Trastuzumab'ın etki mekanizması dikkate alınarak HER2 immobilize edilen elektrot yüzeyleri vasıtasıyla Trastuzumab analizi yapılıp yapılamayacağı elektroanalitik yöntemler kullanılarak incelenmiştir. Bu amaçla yalın PGE, grafen oksit ve çok duvarlı karbon nanotüpler ve bunların altın nanopartiküllü elektrotları kullanılmıştır. Her modifikasyon işleminden sonra CV ve EIS ölçümleri alınmıştır. Üçüncü kısım ise, Trastuzumab'ın triptik bozundurma işlemi sonrasında seçilen peptitleri üzerinden LC-MS/MS analizini içermektedir. IYPTNGYTR işaretli peptidi için m/z 543.2929 ve PTNGYTR fragmenti için m/z 402.3566 iyonu seçilerek LC-Q-TOF-MS sistemi ile analizlenmiştir. HPLC-FLD çalışmalarında, doğrusallık 5.0-120 µg/mL aralığında mükemmel (R=0.999) olmasına rağmen, pik ayrımı yeterli değildir. Ayrıca yöntemin seçiciliği, çoklu tepe oluşumu ve zayıf çözünürlük nedeniyle sınırlıdır. Diğer analitik yöntemlere göre çalışma süresi uzun ve zaman alıcıdır. Elektroanalitik yöntemler değerlendirildiğinde elde edilen veriler doğrultusunda hesaplanan ΔRct değerlerine göre en iyi bağlanma çok duvarlı karbon nanotüpler ile elde edilmiştir. Bu teknik diğer yöntemlere göre anında sonuç almak için büyük bir avantaj sağlamaktadır. Ayrıca elektrokimyasal olarak ilk defa HER2-Trastuzumab etkileşimi kullanılarak Trastuzumab tayininin yapılabileceği görülmüştür. LC-MS/MS çalışmalarında, seçilen peptit üzerinden LC-Q-TOF-MS sistemi kullanılarak Trastuzumab'ın kantitatif analizinin mümkün olduğu bulunmuştur. Anahtar sözcükler: Monoklonal Antikor (mAbs), Trastuzumab, HPLC-FLD, Elektrokimyasal Empedans Spektroskopisi, LC-Q-TOF-MS