Organik asitlerin yüksek basınç sıvı kromatografisi ile ayırımı ve UV-Görünür spektrofotometrik tayinleri

Gıda ve içecek endüstrisindeki organik asitlerin dikkatli bir şekilde izlenmesi ve analizi, endüstrinin sıkı kalite kontrol önlemleri almasını, düzenleyici standartlara uyum sağlamasına ve tüketicilerin güvenli, orijinal ve yüksek kaliteli gıda ve içecek taleplerini karşılamasına imkân tanınmaktadır. Bu çalışmada, Meyve sularındaki ana organik asitlerin (sitrik, malik, tartarik ve süksinik asitler) ters fazlı HPLC-UV tayini için basit ve etkili bir tek adımlı kolon öncesi türevlendirme yöntemi geliştirilmiştir. Organik asitler genel olarak zayıf spektral özelliklere sahiptirler ve bu da bunların HPLC-UV ile doğrudan teşhisi ve tayini çok zorlaştırmaktadır. Geliştirilen tayin yöntemi, söz konusu bu organik asitlerin, N,N'-diizopropilkarbodiimidin varlığında 1-naftilamin reaktifi kullanılarak amid türevlerine dönüştürülmesi, ters-faz HPLC kolonda ayırımlarının sağlanması ve detektör olarak UV spektrofotometrenin kullanılmasıyla meyve suyu numunelerinde analiz edilmeleri aşamalarını içermektedir. AQ-C18 ayırım kolonunun kullanıldığı ters-faz HPLC analizi için hareketli faz olarak Asetonitril (ACN): Metanol (MeOH): Tetrahidrofuran (THF): Su (37:4:1:58 v/v) karışımı kullanılmış ve akış hızı 2.0 mL/dk değerine ayarlanmıştı. Detektör olarak UV Spektrofotometrede 222 nm dalga boyunda ölçümler alınmış ve oda sıcaklığında 22 dakika içinde organik asitlerin amid türevleri mükemmel bir ayırım sağlanmıştı. Organik asitlerin gözlenebilme sınırları; sitrik asit için 0,69 µg/mL, tartarik asit için 0,18 µg/mL, malik asit için 0,48 µg/mL ve süksinik asit için 0,14 µg/mL olarak bulunmuştu. Herhangi bir ekstraksiyon basamağı içermeyen geliştirilen yöntem, yaygın bir şekilde tüketilen üç farklı meyve suyu örneğine başarı ile uygulanmıştı. Organik asit türevlerinin 1 mL portakal suyunda numunesinden geri alınabilirliği % 88,97-92,52, bağıl standart sapma ile % 2,95-4,56 düzeyinde, 1 mL elma suyunda numunesinden geri alınabilirliği % 85,46-93,14, bağıl standart sapma ile % 2,98-4,55 düzeyinde, 1 mL karışık meyve suyu numunesinden geri alınabilirliği ise % 85,71-89,15, bağıl standart sapma ile % 2,99-4,55 düzeylerinde olduğu belirlenmişti.