Pelajik ve bentik balıklarının solungaçlarından saflaştırılan karbonikanhidraz aktivitelerinin irdelenmesi

Bu çalışmada denizel ortamda bentik bölgede yaşayan Mezgit ve pelajik bölgede yaşayan Hamsi balıklarının solungaçlarından karbonik anhidraz (CA) saflaştırıldı ve karakterize edildi. Mezgit balığı solungacından elde edilen CA enzimi, Sepharose-4B-L tirozin-sülfanilamid afinite kolonunda 14 kat ve %19,5 verimle saflaştırıldı. Hamsi balığı solungacından elde edilen CA enzimi ise 17 kat ve %9,5 verimle saflaştırıldı. Mezgit ve Hamsi balıklarının özgül aktiviteleri sırasıyla 126,4 EU/mg protein ve 1.000,0 EU/mg protein olarak belirlendi. SDS-PAG Elektroforezi sonucunda her iki balığın solungaçlarından saflaştırılan karbonik anhidrazların altbirim molekül kütlesi yaklaşık 29 kDa olan tek protein bantlarına sahip oldukları belirlendi. Solungaçlarından elde edilen CA'ların p-nitrofenil asetat substratı varlığında esteraz aktiviteleri pH 8,0'da ve 40 oC sıcaklıkta en yüksek olduğu belirlendi. Mezgit ve Hamsi balıklarının solungaçlarından saflaştırılan CA' nın, p-nitrofenol asetat substratı varlığında Km ve Vmaks değerleri Lineweaver-Burk grafiğiyle hesaplandı ve sırasıyla Km değeri 0,08 mM ve 0,01 mM, Vmaks değeri 1x107 M/dak ve 2,5x106 M/dak olarak tespit edildi. Mezgit ve Hamsi balıklarının solungaçlarından elde edilen CA' nın sırasıyla sülfanilamid inhibitörü varlığında 6,0 µM ile 4,0 M ve asetazolamid inhibitörü varlığında ise 2,0 µM ile 2,0 M IC50 değerlerine sahip olduğu tespit edildi.