Anoxybacillus flavithermus bakterisinin ısıl kararlı guanozintrifosfat siklohidrolaz-I geninin klonlanması ve ekspresyonu

Bu çalışma, termofilik orjinli Anoxybacillus flavithermus bakterisine ait guanozin trifosfat siklohidrolaz I enziminin karakterizasyonunu içermektedir. Klonlanan gchI geni 603 baz çifti büyüklüğünde toplam 200 amino asidi kodlayan tek bir açık okuma dizinidir. GTP?den dihidroneopterin trifosfat dönüşümünü katalizler. Enzim ekspresyonu pET28a(+) vektörüne klonlandıktan sonra E. coli BL21(DE3)pLysS hücresinde 1 mM IPTG indüksiyonu ile tamamlanmış, saflaştırılması için 6xHis kuyruğuna özel Ni-NTA kolonu kullanılmıştır. Yapılan karakterizasyon sonucunda enzimin 24 kDa büyüklüğünde olduğu SDS-PAGE analizi ve amino asit sekansı hesaplamaları doğrulanmıştır. Enzim en iyi aktivite gösterdiği sıcaklık değeri 65?C ve en uygun pH değeri ise 8,0 olarak belirlendi. Enzime ait kinetik verilere bakıldığında, Vmax?ı 100,93 ± 3,5 nM/dak/mg protein ve Km?si 243 ± 23,25 ?M olarak bulundu. Anahtar Kelimeler: Anoxybacillus flavithermus, GTP, GTP siklohidrolaz I, enzim karakterizasyonu.