The optimization of the high salt, low salt, equilibration, and elution buffers of the downstream process for the protein-a purification of cetuximab, a biosimilar, with phosphate and citrate buffer solutions

İnsanda oluşan en hasar verici kanser türlerinden ikisi baş ve boyun tümörleridir. Bu tümörler damar sistemleri geliştirerek kendilerini besler ve büyütürler. Cetuximab molekülü baş ve boyun tümör hücrelerinin Epidermal Büyüme Faktörü reseptörlerini inhibe eder. Bu sayede tümörlerin damar sistemi geliştirmesini engelleyen Cetuximab, erken evre tedavilerde yaşam süresinde uzama, yaşam kalitesinde artış gibi umut vadeden sonuçlar ortaya koymuştur. Cetuximab molekülünün biyobenzerini elde etmek için yola çıkan Nobel İlaç'ın, üretim miktarını 2000 litrelik ticari üretim boyutuna taşınabilmesi için bu kimyasal saflaştırma ve üretme sürecini optimize etmesi gerekmektedir. Bu tez alt akım sürecinin optimizasyonunun ilk aşamasının tampon çözelti seçimini ele almaktadır. Bu aşamada yer alan Protein-A afinite kromatografisi sitrat ve fosfat tampon çözeltilerinde gerçekleştirilmiş, yapılan deneyler analitik HPLC cihazlarıyla daha küçük ölçeklerde tekrar edilmiş ve doğrulanmış, titre ve verim hesaplamaları yapılmıştır. Daha sonra elusyon aşamasından ayrıştırılan proteinin orijinal molekülün asidik, bazik ve ana varyantına olan benzerlik yüzdeleri ölçülmüştür. Tüm yapılan deneylerin sonunda fosfat tamponu ile perçekleştirilen Protein-A kromatografisinin protein geri kazanımı açısından %95'lik verimlilik barajını aştığı, katyon değişim kromatografisi analizinde de asidik, ana ve bazik varyantların orjinal moleküle benzerliği açısından yüzdesel olarak en yakın olduğu görülmüştür.