Cancur eriğinden (Prunus domestica L.) polifenol oksidazın saflaştırılması ve eriğin antioksidan özelliğinin incelenmesi

Polifenol oksidazlar (PFO), bakır içeren metaloenzimler olup oksijen varlığında, monofenollerin o-difenollere hidroksilasyonunu ve o-difenollerin de o-kinonlara yükseltgenmesini katalizler. Bu çalışmada, Ardahan İli Posof İlçesi Türkgözü Köyü' nden toplanmış olan Cancur Eriğinden (Prunus domestica L.) PFO, Sepharose-4B-L-tirosin-p-aminobenzoik asit afinite jeli kullanılarak saflaştırıldı. PFO, doğal ve SDS-poliakrilamid jel elektroforez ile biyokimyasal özellikleri bakımından karakterize edildi. Cancur eriği PFO' sunun elektroforez kromatogramında iki izoenzime sahip olduğu belirlendi. Cancur eriği PFO' sunun L-tirozin, 3,4-dihidroksihidrosinnamik asit, 3,4-dihidroksifenil propanoik asit, p-kumarik asit, katekol ve 4-metil katekol substratları varlığında en yüksek aktiviteyi 30-40 °C ve pH 5.0-7.0 arasında gösterdiği tespit edildi. Cancur eriği PFO' sunun her bir substratının Michaelis-Menten kinetiğine uyduğu tespit edildi. Kinetik veriler olan Michaelis-Menten sabiti (Km) ve maksimum hız (Vmaks) çizilen Lineaweaver-Burk grafiği yardımıyla hesaplandı. Cancur PFO' sunun hem monofenolaz hem de difenolaz aktivitesine sahip olduğu belirlendi. En fazla katekol substratına ilgi duyduğu ve bunu sırasıyla 4-metil katekol, DHHSA, L-tirozin, DHPPA, p-kumarik asitin izlediği belirlendi. Cancur eriği PFO' sunun 4-metil katekol substratı varlığında askorbik asit, sodyum metabisülfit, benzoik asit ve sodyum azid tarafından inhibe edildiği tespit edildi. Bu inhibitörler için Ki değerleri sırasıyla 0.02, 0.12, 6.0 ve 18.3 mM olarak tespit edildi. Cancur eriğinin sulu özütünde toplam fenol miktarı 114.6±5.0 mg GAE/100 g olarak tespit edildi. Özütte yapılan antioksidan aktivitesi CUPRAC yöntemiyle 30.19±0.96 (mg TEAK/g), DPPH yöntemiyle 1.98±0.02 (mg/mL) ve ABTS yöntemiyle 2.17±0.01 (mg/mL) olarak belirlendi.