In vivo investigation of the epigenetic functions of the CENP-A amino terminal

Sentromerik Protein A (CENP-A) bir histon H3 varyantıdır. Diğer sentromere özgü DNA bağlayıcı faktörlerle birlikte mitoz sırasında kinetokor düzeneğini yönlendirir. Ayrıca, CENP-A, sentromerlerin tanımlanmasını belirleyen epigenetik bir belirteç görevi görür. CENP-A N-terminalinin fosforilasyonu, diğer H3 varyantlarından farklı olduğu için araştırmacıların ilgi odağı olmuştur. İnsan CENP-A serin 7'nin (S7p) fosforilasyonu mitotik girişin bir belirteci olan H3 S10p'ye benzerliği sebebiyle özellikle ilgi çekicidir. Hücre bölünmesi sırasında S7 fosforilasyonunun fonksiyonu ile ilgili tartışmalı bulgular yayınlanmıştır. İnsan CENP-A S7 fosforilasyonu konusunda fikir birliği olmamasının yanı sıra, diğer türlerde karşılık gelen fosforilasyon bölgelerinin işlevi araştırılması gerekeklidir. Yakın tarihli bir yayında, murin CENP-A'nın ilk üç serininin (S15, S16 ve S22) mitoz sırasında insan CENP-A S7p'ye benzer bir rolü olan fosforilasyon bölgeleri olduğu öne sürülmüştür. Bununla birlikte, S15 ve S16 fonksiyonlarını ele alan in vivo bir çalışma bildirilmemiştir. Fare CENP-A N-terminal fosforilasyonunun amacını anlamak için, S15A ve S16A fosforile edilemeyen rezidüleri ifade eden bir knockin fare modeli oluşturmayı amaçladık. Farelerin genetik mühendisliğini yapmak için CRISPR-EZ teknolojisini (Zigotların CRISPR ribonükleoprotein Elektroporasyonu) kullandık. İlk olarak, kendi protokollerimizi optimize etmek için, hedefleme ve genotipleme protokolleri yayınlanan fare Tyr lokusunu düzenledik. Albino Tyr knockout fare modelini başarıyla ürettikten sonra, CENP-A knockout fare modelini oluşturmayı hedefledik. Oluşturulan homozigot knockin fareleri canlı ve doğurgan olması sebebiyle CENP-A N-terminal fosforilasyonunun kromozom ayrımı için önemli bir rolü olmadığı sonucuna vardık. N-terminal fosforilasyonunun epigenetik fonksiyonlarını karakterize etmek için ayrıntılı çalışmaların yapılması gerekmektedir.