Effects of miR-376 family miRNAs on CHRNA5 depleted MCF7 cell line model and co-culture competition studies

Kolinerjik reseptör nikotinik alfa 5 (CHRNA5) ligand kapılı iyon kanalları olan nikotinik asetilkolin reseptörlerinin alt birimlerinden biridir. CHRNA5'in tümörgenezde rolü, daha önce akciğer dokusunda gösterilmiştir. Yüksek CHRNA5 ekspresyonunun, akciğer kanserinde daha kötü prognoza ile korelasyonu gösterilmiştir. Buna ek olarak, laboratuvar üyelerimiz yakın zamanda meme kanseri hücre hattı MCF7'deki CHRNA5 ifadesinin deplesyonunun antiproliferatif etkilerini olduğunu göstermiştir (TÜBİTAK 111T316). Bu MS tezinin baz alındığı çalışmada ise, CHRNA5 deplesyonunun mikroRNA ekspresyon profili üzerindeki etkileri araştırılmış ve miR-376 familyası mikroRNA'larının iki üyesinin ifadelerinde (miR-376a-3p ve miR-376c-3p) anlamlı bir azalma tanımlanmıştır. Bu iki mikroRNA'nın etkilerini test etmek için ekspresyon seviyeleri, CHRNA5 tüketilmiş MCF7 hücrelerinde, mikroRNA mimik sistemleri kullanılarak kurtarılmıştır. CHRNA5 siRNA ile miR-376a mimik uygulamasının arasındaki sinerjizmi ve/veya antagonizmini araştırmak için bir mikrodizilim çalışması yapılarak dahil olan sinyal yolları tanımlanmıştır. İlgili genlerin ifadeleri, her iki mikroRNA için RT-qPCR ile test edildikten sonra gen ifade kurtarımının, hücre fenotipi ve hücre canlılığı üzerindeki etkileri, sırasıyla faloidin boyaması ve MTT deneyleri kullanılarak kontrol edilmiştir. Daha sonra, farklı flüoresan molekülleri eksprese eden MCF7 hücre hatları kullanılarak bir ko-kültür bazlı rekabet protokolü geliştirilmiş olup akış sitometresi ve flüoresan görüntüleme metotları ile hücreler arası rekabet değerlendirilmiştir. Sonuçlar, si-CHRNA5'in ve miR-376 ailesinden iki üyenin mikroRNA mimikleri birlikte kombinasyonel etkilerinin antitümör etkilerinin artışını desteklediği görülmüştür.